蘋(píng)果SUMO E3連接酶MdSIZ1調(diào)控逆境應(yīng)答和花青苷積累的研究.pdf

1、翻譯后修飾在真核生物中發(fā)揮著重要作用，小泛素相關(guān)修飾物SUMO（small ubiquitin-related modifier）是真核生物中一種重要的翻譯后修飾。在SUMO結(jié)合底物的過(guò)程中有三種酶參與，分別是E1（激活酶）、E2（結(jié)合酶）、E3（連接酶）。植物SIZ1作為一種E3連接酶，促進(jìn)底物和目標(biāo)蛋白的結(jié)合。SIZ1調(diào)控逆境脅迫下產(chǎn)生的SUMO結(jié)合。目前已在擬南芥、水稻、石斛蘭以及蘋(píng)果等植物中發(fā)現(xiàn)SIZ1蛋白的存在。但是，對(duì)于唯一

2、的木本植物蘋(píng)果中的MdSIZ1還并沒(méi)有進(jìn)行作用機(jī)理的研究。本文對(duì)蘋(píng)果中的MdSIZ1的功能及其調(diào)控的生理過(guò)程進(jìn)行了研究。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴研究發(fā)現(xiàn)蘋(píng)果中的MdSIZ1可以在體內(nèi)和體外發(fā)揮SUMO E3連接酶的作用。低溫、高溫、以及脫落酸處理會(huì)導(dǎo)致蘋(píng)果組培苗體內(nèi)SUMO結(jié)合水平提高。在擬南芥突變體siz1-2中異位表達(dá)MdSIZ1，部分恢復(fù)了擬南芥的缺陷表型以及SUMO結(jié)合水平。研究證明，MdSIZ1與AtSIZ1具有類(lèi)似

3、的功能，并且MdSIZ1介導(dǎo)的SUMO化在調(diào)控植物適應(yīng)逆境脅迫方面發(fā)揮著重要作用。⑵在擬南芥中AtSIZ1調(diào)控缺磷脅迫。本研究發(fā)現(xiàn)，在缺磷處理的組培苗中，MdSIZ1的表達(dá)量和SUMO結(jié)合水平明顯提高。蘋(píng)果中，缺磷誘導(dǎo)的MYB轉(zhuǎn)錄因子MdPHR1被SUMO化修飾。異位表達(dá)MdSIZ1基因部分恢復(fù)了擬南芥突變體siz1-2在缺磷條件下的突變表型。研究還發(fā)現(xiàn)，在缺磷條件下突變體siz1-2的存活率與野生型相比明顯下降，而異位表達(dá)MdSIZ1

4、基因部分恢復(fù)了這種存活率下降的現(xiàn)象。為驗(yàn)證MdSIZ1在蘋(píng)果缺磷脅迫的作用，我們使用過(guò)量表達(dá)和沉默表達(dá)的MdSIZ1轉(zhuǎn)基因愈傷組織進(jìn)行研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在缺磷條件下，過(guò)表達(dá)MdSIZ1的愈傷組織與野生型相比鮮重提高，而沉默表達(dá)MdSIZ1的愈傷組織在缺磷條件下無(wú)法生長(zhǎng)。研究證明，MdSIZ1過(guò)表達(dá)提高了蘋(píng)果對(duì)缺磷脅迫的耐受性。⑶在蘋(píng)果中，果實(shí)色澤是一種重要的外觀品質(zhì)性狀，而花青苷是決定蘋(píng)果果實(shí)顏色的重要次生代謝產(chǎn)物，花青苷的合成受溫度、光照

5、、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及植物激素的調(diào)控。轉(zhuǎn)錄因子MdMYB1在調(diào)控花青苷合成方面發(fā)揮重要作用，用MdMYB1進(jìn)行酵母雙雜交篩庫(kù)，對(duì)陽(yáng)性克隆的測(cè)序結(jié)果表明，MdMYB1可能與MdSIZ1相互作用，隨后，二者的相互作用被酵母雙雜、Pull-Down、Co-IP試驗(yàn)所證明。隨后的研究表明，MdSIZ1作為SUMO E3連接酶調(diào)控MdMYB1的SUMO化，被SUMO化修飾的MdMYB1蛋白穩(wěn)定性提高，防止其被26S蛋白酶體降解；另外，研究發(fā)現(xiàn)，在愈傷和蘋(píng)