DT390-IL2重組質(zhì)粒治療實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、一、MBP的提取、鑒定和EAE模型建立 MBP的提取參照Kies法并稍加改進(jìn).提取以牛脊髓為原料,通過反復(fù)脫脂、抽濾、酸溶解抽提出MBP,再用SDS-PAGE對(duì)所抽提的MBP進(jìn)行了鑒定,結(jié)果表明該實(shí)驗(yàn)所抽提的MBP分子量在14.4~20.1kD之間,符合預(yù)期值.同時(shí),經(jīng)過反復(fù)摸索,用提取的MBP免疫豚鼠,成功建立了EAE模型,一方面證實(shí)了該研究建立的方法所制備的MBP具有較高的致EAE活性;另一方面EAE模型的建成,為該課題組研究自身免

2、疫性疾病的生物治療法建立了一種良好的動(dòng)物模型,也為該室后續(xù)的治療性研究提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ).二、DT390-IL2重組質(zhì)粒的提取和EAE的治療性實(shí)驗(yàn) 該實(shí)驗(yàn)采用亞精胺法來提取DT390-IL2重組質(zhì)粒,通過質(zhì)粒DNA的雙酶切鑒定,證實(shí)了所提取的質(zhì)粒的正確性,并通過紫外分光光度法證實(shí)其純度也較高.同時(shí),該實(shí)驗(yàn)還對(duì)亞精胺法和該室常用的商品化的質(zhì)粒大抽試劑盒(如Qiagen plasmid Maxi Kit)進(jìn)行比較,結(jié)果表明,兩種方法制備的質(zhì)粒D

3、NA純度相近,但要獲得相同數(shù)量的質(zhì)粒,亞精胺法的花費(fèi)卻不到Qiagen試劑盒的十分之一,說明亞精胺法是大量制備質(zhì)粒DNA的一種高效而又經(jīng)濟(jì)的方法,值得推廣應(yīng)用.在EAE的治療性實(shí)驗(yàn)中,從注射MBP抗原第2天開始,分別將裸質(zhì)粒DT390-IL2和PLGA(聚丙交酯乙交酯)包被質(zhì)粒DT390-IL2經(jīng)肌肉注射入豚鼠體內(nèi),通過觀察豚鼠臨床癥狀和中樞神經(jīng)組織病變情況,發(fā)現(xiàn)三個(gè)治療組豚鼠的EAE癥狀比未治療組豚鼠均有明顯減輕甚至完全康復(fù),初步表明