他汀類藥物治療實驗性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎和多發(fā)性硬化的免疫學(xué)研究.pdf

1、目的： 研究他汀類藥物對致敏的EAE模型脾單個核細(xì)胞增殖的影響，以及與人重組干擾素β1a(INFβ-1a)的協(xié)同作用；研究他汀類藥物對致敏的MS患者外周血單個核細(xì)胞增殖的影響，以及與人重組干擾素β1a的協(xié)同作用。通過這兩方面的研究，初步探討他汀類藥物治療EAE及MS的免疫調(diào)節(jié)機制。 方法： ①以MOGIGd融合蛋白為抗原分別致敏C57BL/6小鼠、Lewis大鼠，免疫后第10天處死，取其脾臟制成單個核細(xì)胞懸液，調(diào)

2、整細(xì)胞密度為2×106/ml，加入96孔板中每孔100ul，分別予ConA、LPS及MOG刺激，同時給予不同濃度辛伐他汀、INFβ-1a進行干預(yù)，培養(yǎng)48h后，加入3H-TdR0.5uci/孔，繼續(xù)培養(yǎng)16h，然后用細(xì)胞收集器收集，β液閃儀計數(shù)，結(jié)果以每分鐘脈沖數(shù)(CPM)表示，研究辛伐他汀對經(jīng)ConA、LPS及MOG刺激的脾單個核細(xì)胞增殖的影響，及其與INFβ-1a的協(xié)同作用。②根據(jù)McDonald(2005年)診斷標(biāo)準(zhǔn)，收集2007

3、年6月～2009年1月在溫州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院神經(jīng)免疫專病門診或住院確診為MS的患者15例，要求在近期均未行特殊免疫治療，并設(shè)正常對照組(NC)12例。用人淋巴細(xì)胞分離液分離MS患者外周血單個核細(xì)胞(PBMC)，調(diào)整細(xì)胞密度為2×106/ml，加入96孔板中每孔100ul，分別予ConA、LPS及MoG刺激，同時給予不同濃度辛伐他汀、INFβ-1a進行干預(yù)，培養(yǎng)48h后，加入3H-TdR0.5uci/孔，繼續(xù)培養(yǎng)16h，然后用細(xì)胞收集器

4、收集，β液閃儀計數(shù)，結(jié)果以每分鐘脈沖數(shù)(CPM)表示，研究辛伐他汀對經(jīng)ConA、LPS及MoG刺激的MS患者外周血單個核細(xì)胞增殖的影響，及其與INFβ-1a的協(xié)同作用。 結(jié)果： ①辛伐他汀在1～100uM濃度范圍內(nèi)以劑量依賴的方式抑制了經(jīng)ConA、LPS及MoG致敏的EAE小鼠、大鼠脾單個核細(xì)胞的增殖，對未受刺激物致敏的脾單個核細(xì)胞無影響。與陰性對照組相比，單用低劑量的辛伐他汀、INFβ-1a其抑制增殖作用差異均無統(tǒng)計學(xué)

5、意義(P>0.05)；低劑量的兩藥聯(lián)用則對經(jīng)ConA、MOG致敏的EAE小鼠、經(jīng)ConA致敏的EAE大鼠脾單個核細(xì)胞抑制增殖作用增強，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；對經(jīng)LPS致敏的EAE小鼠、經(jīng)LPS、MOG致敏的EAE大鼠脾單個核細(xì)胞其抑制增殖作用雖有所增強，但與陰性對照組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。②辛伐他汀在1～100uM濃度范圍內(nèi)以劑量依賴的方式抑制了經(jīng)ConA、LPS、MOG致敏的MS患者外周血單個核細(xì)胞的增殖