MDV分離毒株生物學(xué)特性及其在宿主染色體整合的研究.pdf

1、雞馬立克氏病(MD)是一種雞的高度傳染性腫瘤病，該病以淋巴組織增生和腫瘤轉(zhuǎn)化為特征。MD病原為雞馬立克氏病病毒(MDV)，MDV感染可以直接導(dǎo)致宿主死亡和生產(chǎn)性能降低，并且間接導(dǎo)致免疫抑制。MDV廣泛流行于世界各地養(yǎng)禽的國家和地區(qū)，對養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。MD的防控手段主要是疫苗免疫預(yù)防，但是MD疫苗并不能誘導(dǎo)清除性免疫，MDV野毒株和疫苗株可以共存于宿主體內(nèi)，并不斷復(fù)制和排毒，導(dǎo)致MDV野毒株的不斷進(jìn)化。雖然我國實(shí)行MD普遍免疫

2、，但近年來各地常有MD發(fā)生，給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大危害。因此有必要了解我國MDV的流行情況，并對MDV野毒株進(jìn)行分離鑒定，進(jìn)一步研究其生物學(xué)特性，分析其進(jìn)化規(guī)律。這些研究對于MDV的基礎(chǔ)研究和MD防控均有重要意義。
　　本研究中，我們對2015年8月至2016年7月收到的來自15省份的489份臨床疑似MD病料進(jìn)行了檢測，MDV陽性率達(dá)到42.7％，MDV陽性病料中混合感染禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生征病毒(REV)、禽傳染性貧血病毒(CIAV)和

3、禽白血病病毒(ALV)的占比分別為12.6％、17.5％和1.8％。對部分MDV單獨(dú)陽性的病料進(jìn)行病原的分離鑒定，獲得4株MDV細(xì)胞適應(yīng)毒株，分別命名為BC/15、HLD/16、JL/16和SY/15。PCR鑒定發(fā)現(xiàn)BC/15和HLD/16具有MDV野毒株特點(diǎn)，而JL/16和SY/15具有MDV疫苗或弱毒株特征?；趍eq基因的遺傳進(jìn)化分析發(fā)現(xiàn)，BC/15和HLD/16與絕大多數(shù)MDV中國分離致病毒株處于同一進(jìn)化分支，并且兩者單獨(dú)形成新

4、的進(jìn)化分支;而JL/16和SY/15與早期中國分離毒株J-1、疫苗株CVI988和814以及弱毒株CU-2處于同一近化分支。這些結(jié)果表明具有不同遺傳特征的MDV毒株在我國流行，且MDV毒株依然在不斷進(jìn)化。
　　2015年，本實(shí)驗(yàn)室于吉林省一個(gè)CVI988疫苗免疫后發(fā)生MD的雞群中分離得到一株MDV毒株BS/15。通過PCR和IFA鑒定發(fā)現(xiàn)MDV BS/15具有MDV野毒株特征，進(jìn)一步對其meq、vIL-8、pp38和ICP4等4個(gè)

5、致病相關(guān)基因進(jìn)行序列對比發(fā)現(xiàn)MDV BS/15符合中國分離致病毒株的遺傳特征，擁有多個(gè)MDV中國分離毒株特有的突變。為了研究BS/15的致病性以及評價(jià)疫苗對其保護(hù)效果，我們比較了MDV BS/15和MDV參考毒株-超強(qiáng)毒(vvMDV) Md5在SPF雞中的致病性，并比較評價(jià)了在我國應(yīng)用最廣泛的CVI988和814疫苗對這兩個(gè)毒株的保護(hù)效果。結(jié)果表明，在攻毒后90 d試驗(yàn)期內(nèi)，MDV BS/15和Md5都能導(dǎo)致100％SPF雞發(fā)生MD，兩

6、者引起的死亡率相似，分別為85.7％和80.0％。MDV BS/15攻毒組腫瘤率達(dá)到64.3％，高于Md5攻毒組40.0％的腫瘤率。但是相對于Md5感染雞，BS/15感染雞的存活時(shí)間更長，生長發(fā)育障礙較輕微，免疫器官損傷程度相似。這些結(jié)果表明MDV BS/15毒力與Md5大致相似，但是其致病特征發(fā)生改變。值得關(guān)注的是，CVI988和814疫苗對BS/15的保護(hù)指數(shù)分別為33.3和66.7，而兩種疫苗對Md5的保護(hù)指數(shù)分別為92.9和10

7、0。這表明兩種疫苗雖然對超強(qiáng)毒力的Md5保護(hù)效果良好，但都不能對BS/15提供足夠的保護(hù)，尤其是CVI988疫苗。這些數(shù)據(jù)MDVBS/15具有“延遲毒力”和超高疫苗抗性的特征。該研究表明我國存在MDV變異毒株，這些毒株的流行可能是現(xiàn)地MD免疫失敗的原因之一。該研究能夠幫助我們了解我國MDV流行毒株的致病特征和進(jìn)化特征。
　　本研究中分析了MDV感染雞中樞免疫器官干擾素的表達(dá)，并首次比較分析了不同MDV毒株(BS/15和Md5)感染

8、雞中宿主干擾素的差異表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)MDV感染可顯著抑制SPF雞法氏囊和胸腺中IFN-α和IFN-β的表達(dá)。在MDV感染前期IFN-γ顯著上調(diào)表達(dá)，而后IFN-γ顯著下調(diào)表達(dá)，這些結(jié)果表明MDV能夠影響宿主先天免疫系統(tǒng)并抑制干擾素表達(dá)，從而逃避宿主抗病毒作用。另外，不同MDV毒株感染對宿主干擾素差異表達(dá)的影響作用顯著不同，這可能與MDV毒株之間不同的致病特征和疫苗抗性具有一定相關(guān)性。
　　為了進(jìn)一步分析不同毒株的感染進(jìn)程，本研究建立

9、了檢測MDV基因組在宿主染色體整合的熒光原位雜交方法(FISH)，檢測了體內(nèi)感染模型中MDV基因組在宿主染色體中的整合情況，首次分析了不同MDV毒株（BS/15和Md5）在宿主染色體整合的規(guī)律。結(jié)果表明不同MDV毒株在宿主染色體中的整合規(guī)律不同。綜合MDV BS/15和Md5致病性的研究結(jié)果，提示不同MDV毒株在宿主染色體中整合能力的差異與其致病特征具有一定的相關(guān)性。
　　綜上所述，本研究對我國部分MDV流行毒株進(jìn)行了檢測、分離、