雌激素受體β表達(dá)對(duì)于乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)特性及內(nèi)分泌治療的影響.pdf

1、乳腺癌是女性最為常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，內(nèi)源性雌激素起著主要作用，約50％的原發(fā)性乳腺癌與雌激素相關(guān)。傳統(tǒng)的內(nèi)分泌治療主要針對(duì)ERα，然而大量臨床研究表明：ERα陽(yáng)性的乳腺癌患者，只有約60%的患者對(duì)他莫昔芬激素治療有效，40%的患者對(duì)于內(nèi)分泌治療不敏感，而 ERα陰性的乳腺癌中有10%的患者對(duì)于內(nèi)分泌治療有效。
　　ERβ自1996年Mosselman等人發(fā)現(xiàn)以來(lái)，因?yàn)槠湓谌橄侔┲械臐撛谧饔靡约皩?duì)于預(yù)測(cè)內(nèi)分

2、泌治療反應(yīng)性的價(jià)值成為了研究熱點(diǎn)。ERβ與ERα在分子結(jié)構(gòu)和受體分布上的不同提示二者在功能上存在著差異。然而對(duì)于 ERβ的表達(dá)在腫瘤中的生物學(xué)作用以及 ERβ表達(dá)提示乳腺癌激素治療敏感還是耐藥，現(xiàn)階段的研究結(jié)果還存在著巨大的差異。有研究表明ERβ的生物學(xué)功能受ERα表達(dá)狀態(tài)的影響，所以，我們想通過(guò)本次試驗(yàn)研究在ERα陰性和ERα陽(yáng)性的不同條件下ERβ的功能。
　　目的：
　　通過(guò)將包含 ERβ基因的質(zhì)粒 pReveicer-

3、M72-ERβ對(duì)MCF-7細(xì)胞和MDA-MB-231進(jìn)行轉(zhuǎn)染，研究在ERα陽(yáng)性和ERα陰性的不同條件下，外源性ERβ的表達(dá)對(duì)乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，以及 ERβ的表達(dá)是否改變細(xì)胞對(duì)雌二醇、他莫昔芬的反應(yīng)；探討ERβ的功能及ERβ與ERα之間的相互關(guān)系及可能的相互作用，以及ERβ能否作為一種預(yù)測(cè)因子，與ERα一起共同預(yù)測(cè)腫瘤對(duì)于內(nèi)分泌治療的反應(yīng)性。
　　方法:
　　（1）提取包含 ERβ基因的質(zhì)粒 pReveicer-M72-E

4、Rβ并通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。
　?。?）利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑 Lipofectmine LTX將質(zhì)粒pReveicer-M72-ERβ對(duì)MCF-7細(xì)胞和MDA-MB-231進(jìn)行轉(zhuǎn)染，兩種細(xì)胞均設(shè)置空載體組和空白對(duì)照組。
　?。?）細(xì)胞轉(zhuǎn)染后20小時(shí)，通過(guò)熒光顯微鏡、免疫熒光及Western Blot等方法驗(yàn)證ERβ基因在細(xì)胞中的表達(dá)。
　?。?）將細(xì)胞分為MCF-7組、MCF-7ERβ組、MCF-7空組、MDA-M

5、B-231組、MDA-MB-231 ERβ組、MDA-MB-231空組，對(duì)各組細(xì)胞進(jìn)行雌二醇、他莫昔芬處理，并同時(shí)設(shè)置未處理組作為對(duì)照。用MTT法繪制各組細(xì)胞在不同處理因子作用下的生長(zhǎng)曲線。
　　結(jié)果:
　　（1）瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)顯示提取的質(zhì)粒 pReveicer-M72-ERβ與預(yù)期大小相一致。
　　（2）Western Blot證實(shí)MCF-7ERβ組和MDA-MB-231 ERβ組的ERβ表達(dá)量與各自對(duì)照組相比顯

6、著增高。
　?。?）與 MDA-MB-231組和MDA-MB-231空組相比，MDA-MB-231 ERβ組細(xì)胞生長(zhǎng)速度加快，三組細(xì)胞對(duì)于雌二醇、他莫昔芬的反應(yīng)無(wú)差異性。
　?。?）與MCF-7組和MCF-7空組對(duì)比，MCF-7ERβ組細(xì)胞生長(zhǎng)速度減慢；在雌二醇的作用下，MCF-7ERβ組細(xì)胞的生長(zhǎng)速度比其他兩組細(xì)胞減慢，三組細(xì)胞對(duì)于他莫昔芬的反應(yīng)無(wú)差異性。
　　結(jié)論:
　?。?）在ERα表達(dá)的條件下，ERβ的表