S100A4和S100A6在去勢大鼠骨組織中表達(dá)及意義.pdf

1、目的:探索S100A4和S100A6在大鼠卵巢切除骨質(zhì)疏松模型中及在成骨細(xì)胞分化和破骨細(xì)胞分化中表達(dá)及意義。
　　方法:
　　1.取臺州醫(yī)院患者股骨頭標(biāo)本10例，使用改良TRIZOL法提取骨組織總RNA，通過半定量RT-PCR方法檢測骨組織中S100A1、S100A2、S100A3、S100A4、S100A5、S100A6、S100A7、S100A8、S100A9、S100A10及S100B mRNA表達(dá)情況。
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2、.選擇健康6月齡雌性SD大鼠96只，購買浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院，體重約為460±20g，隨機(jī)分成8組，4組為雙側(cè)卵巢切除組（OVX組），4組為假手術(shù)組（Sham組）。在術(shù)后1月、2月、3月、6月時處死大鼠，行血生化檢查(Ca、P、E2)、股骨HE染色及qCT等檢查;通過Real Time RT-PCR的方法檢測S100A4、S100A6、堿性磷酸酶(ALP)和耐酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)mRNA在卵巢切除術(shù)后各時間段的表達(dá)情況;通過免疫組織

3、化學(xué)檢測S100A4和S100A6在卵巢切除術(shù)后各時間段大鼠股骨下段中表達(dá)情況。
　　3.將MC3T3-E1細(xì)胞按1×105/ml密度接種到10％小牛血清a-MEM培養(yǎng)液的6孔板上，置于5％CO2及37℃保濕的溫箱中孵育24h，分成成骨誘導(dǎo)組和對照組;分別培養(yǎng)3天、7天、14天和21天，檢測各時間段的茜素紅染色和堿性磷酸酶染色情況;同時收集各時間段細(xì)胞，使用TRIZOL法提取細(xì)胞總RNA，通過RealTime RT-PCR的方法檢

4、測S100A4、S100A6和ALP mRNA表達(dá)情況。
　　4.將RAW264.7細(xì)胞按1×105/ml密度接種到10％小牛血清a-MEM培養(yǎng)液的6孔板上，置于5％CO2及37℃保濕的溫箱中孵育24h，加入破骨細(xì)胞誘導(dǎo)液，分別培養(yǎng)0天、1天、3天和5天，收集各時間段細(xì)胞，通過RealTime RT-PCR的方法檢測S100A4、S100A6和TRAP mRNA等表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1.人股骨頭中S100A4和

5、S100A6mRNA表達(dá)最高，S100A10mRNA表達(dá)較低，S100A1、S100A2、S100A5、S100A7、S100A8和S100A9 mRNA表達(dá)極低，S100A3和S100BmRNA等無表達(dá)。
　　2.S100A4和S100A6在大鼠卵巢切除骨質(zhì)疏松模型中表達(dá)結(jié)果:(1)、大鼠卵巢切除術(shù)后，雌激素逐漸減少，同時HE染色和qCT提示骨密度逐漸減少及骨小梁越來越少，在術(shù)后3月時骨質(zhì)疏松造模成功。(2)、與Sham組比較，

6、 OVX組中S100A4 mRNA表達(dá)在術(shù)后1月和2月升高，在術(shù)后3月和6月減少(P＜0.05); OVX組中S100A6表達(dá)在術(shù)后1月和2月減少，在術(shù)后6月升高(P＜0.05); OVX組中ALP mRNA表達(dá)在術(shù)后1月減少，在術(shù)后6月增加(P＜0.05); OVX組中TRAP mRNA表達(dá)在術(shù)后1月到2月增加(P＜0.05); S100A6和ALP mRNA表達(dá)隨著骨量減少而增加，而S100A4和TRAP剛好相反。(3)、S100A

7、4和S100A6蛋白在骨細(xì)胞中均有表達(dá)，其表達(dá)趨勢與PCR結(jié)果一致。
　　3.S100A4和S100A6在MC3T3-E1細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化中表達(dá)結(jié)果:(1)、與對照組相比，成骨誘導(dǎo)組ALP活性在14天時最強(qiáng)，在21天時出現(xiàn)典型鈣結(jié)節(jié)。(2)、與對照組比較，誘導(dǎo)組中S100A4和S100A6 mRNA均在3天、21天表達(dá)升高(P＜0.05)，誘導(dǎo)組中ALP mRNA在各時間點(diǎn)表達(dá)均升高(P＜0.05)。
　　4.S100A4和