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文檔簡介
1、潛伏感染是慢病毒逃脫宿主免疫監(jiān)視和免疫清除的重要機(jī)制。宿主通過先天免疫以及獲得性免疫抵抗外界病毒的感染。干擾素調(diào)節(jié)是先天免疫的重要組成部分,干擾素可以誘導(dǎo)一系列干擾素刺激基因的大量表達(dá)。干擾素刺激基因所編碼干擾素刺激蛋白的高水平表達(dá)可以抑制病毒的復(fù)制,這種抑制是導(dǎo)致慢病毒建立潛伏感染的原因之一。諸多外界因素可以影響慢病毒的感染狀態(tài),使慢病毒由潛伏感染轉(zhuǎn)向裂解感染。其中其他病毒與慢病毒的超感染便是影響因素之一,其他病毒的超感染往往可以促進(jìn)
2、慢病毒的復(fù)制。本研究以牛免疫缺陷病毒(BIV)為慢病毒模型,對一種干擾素刺激蛋白ISG15在BIV潛伏感染中的作用進(jìn)行了初步的探討。ISG15是一種可以被Ⅰ型干擾素誘導(dǎo)表達(dá)的小分子蛋白,屬于類泛素修飾蛋白家族。與泛素類似,ISG15可以共價地連接到一些蛋白上,進(jìn)行蛋白的翻譯后修飾,該修飾稱之為蛋白質(zhì)的ISGylation修飾。ISG15以及ISGylation修飾參與多種重要的生物學(xué)過程,其中包括:先天免疫、腫瘤發(fā)生以及懷孕建立等。各種
3、屬間ISG15的氨基酸序列同源性并不高。目前,對于牛ISG15(bovineISG5,bISG15)的研究主要集中于其在母牛懷孕的建立方面,而bISG15在先天免疫以及抗病毒方面的研究基本上是空白。我們首先建立了bISG15的相關(guān)檢測體系,包括bISG15的體外啟動子Luciferase報告系統(tǒng)、bISG15 mRNA的RT-PCR檢測系統(tǒng)以及bISG15表達(dá)的Western-blot檢測系統(tǒng)等。在此基礎(chǔ)上,對bISG15在胎牛肺細(xì)胞(
4、FBLs一種BIV的飼養(yǎng)細(xì)胞)中的表達(dá)、BIV與bISG15的相互影響(包括BIV感染對bISG15表達(dá)水平的影響、blSG15對BIV復(fù)制的抑制、BIV調(diào)控蛋白bTat對bISG15抑制的抵抗等)進(jìn)行了初步的研究。最后,我們研究了RNA病毒牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)和DNA病毒牛皰疹病毒Ⅰ型(BHV-1)對bISG15表達(dá)的影響,并對其分子機(jī)制進(jìn)行了初步探討。本文獲得了以下重要結(jié)果及結(jié)論:1.通過RT-PCR以及Western-bl
5、ot檢測系統(tǒng)證實,FBLs中bISG15本底表達(dá)水平不高,但通過poly I:C或LPS刺激可以引起bISG15表達(dá)水平的上調(diào):2.通過免疫熒光以及染色體免疫沉淀實驗證實,FBLs中bISG15表達(dá)水平的上調(diào)與干擾素調(diào)節(jié)因子3(IRF-3)密切相關(guān),并通過體外轉(zhuǎn)染實驗證明IRF-3過表達(dá)可以激活bISG15的啟動子;3.BIV感染FBLs,可以引起bISG15的少量上調(diào),而隨感染進(jìn)行bISG15的增加表達(dá)水平逐漸下降;4.bISG15參
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