宿主限制因子和自噬在原型泡沫病毒建立潛伏感染中的作用.pdf

1、泡沫病毒(foamy viruses,FVs)是一類復(fù)雜而又獨特的反轉(zhuǎn)錄病毒,其轉(zhuǎn)錄調(diào)控和生活周期均存在諸多獨特之處。泡沫病毒感染體外培養(yǎng)的細胞可以引發(fā)強烈的細胞病變,但在機體中不表現(xiàn)任何病癥,處于長期的潛伏感染狀態(tài)。目前普遍認為泡沫病毒的潛伏感染可能是機體多層次、多水平的抗病毒作用的結(jié)果,但其具體機制尚不清楚。本研究以原型泡沫病毒(prototypic foamy virus,PFV)為材料,從宿主細胞的一種限制因子tetherin和

2、一種抗病毒的細胞進程細胞自噬入手,研究泡沫病毒與宿主間的相互作用,初步揭示宿主因素在原型泡沫病毒建立潛伏感染中的作用,從某一層面闡明泡沫病毒的潛伏機理。
　　 Tetherin是一種新型的抗病毒因子,它是一種干擾素誘導(dǎo)蛋白,可以抑制多種包膜病毒的釋放。研究發(fā)現(xiàn),tetherin的抗病毒作用具有一定的廣譜性,而許多病毒已經(jīng)進化出抵抗tetherin的方法。對于泡沫病毒與tetherin的關(guān)系,目前尚不明了,這是本研究所關(guān)注的主要內(nèi)

3、容之一。本研究利用指示細胞系、上清中病毒Gag蛋白的表達及病毒基因組拷貝數(shù)的分析來指示tetherin對PFV的抑制作用。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),tetherin可以抑制PFV的釋放,且這種抑制作用可以被HIV-1的Vpu蛋白所拮抗。Tetherin的跨膜區(qū)(transmembrane domain,TM)及糖基磷脂酰肌醇(glycosyl phosphatidylinositol,GPI)錨定區(qū)對其抑制PFV發(fā)揮著十分重要的作用,而其二聚化和糖

4、基化則不是必需的。來源于人、猴、牛和狗的tetherin均可抑制PFV的釋放;而且與人tetherin類似,猴源tetherin的跨膜區(qū)和GPI錨定區(qū)對其發(fā)揮抑制作用也是十分重要的。此外,本研究并未發(fā)現(xiàn)PFV存在可以抵抗tetherin的機制,PFV的感染則可以增加潛伏感染的HeLa細胞內(nèi)tetherin的表達,這可能是PFV在HeLa細胞中潛伏感染的原因之一。
　　 細胞自噬是真核細胞降解損壞的細胞器和長半衰期蛋白的一種蛋白降

5、解途徑,對維持細胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定具有重要的作用,同時也是細胞天然免疫的一部分,在抵抗病原體感染等過程中發(fā)揮著重要的作用。但由于細胞自噬的高度保守性,許多病原體進化出逃避細胞自噬的識別,甚至可以利用細胞自噬為病毒的復(fù)制增殖服務(wù)的策略。為了研究泡沫病毒與細胞自噬的關(guān)系,我們利用westernblotting檢測LC3 II的表達及激光共聚焦顯微鏡定量含有自噬泡結(jié)構(gòu)的細胞數(shù)來指示細胞的自噬水平。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),PFV感染293T細胞可以誘發(fā)細胞自