牛泡沫病毒感染過程中病毒與宿主細(xì)胞的相互作用.pdf

1、泡沫病毒屬于反轉(zhuǎn)錄病毒科泡沫病毒亞科,其在體外雖可使細(xì)胞發(fā)生強(qiáng)烈病變,在體內(nèi)卻不表現(xiàn)任何病癥,處于長(zhǎng)期潛伏感染狀態(tài),而其潛伏機(jī)制目前尚不清楚。目前為止,只有一篇關(guān)于過表達(dá)早幼粒細(xì)胞白血病蛋白(PML)能夠抑制人泡沫病毒(PFV)復(fù)制的報(bào)道,但隨后的研究卻表明,PML與PFV處于潛伏狀態(tài)無關(guān)。因而可推知在細(xì)胞中一定存在其它一些重要的細(xì)胞蛋白介導(dǎo)泡沫病毒處于長(zhǎng)期潛伏狀態(tài)。 本文以牛泡沫病毒中國(guó)毒株BFV3026為材料,利用酵母雙雜交

2、系統(tǒng),通過釣取與BFV的反式激活因子BTas相互作用的細(xì)胞蛋白,探討B(tài)FV感染細(xì)胞后病毒與宿主細(xì)胞的相互作用,并期望通過該方法,找到抑制BTas反式激活作用以使BFV處于潛伏感染的細(xì)胞蛋白。除此之外,本文還對(duì)BTas自身的功能進(jìn)行深入探究。 本文獲得了以下重要結(jié)果及結(jié)論：1.通過酵母雙雜交首次“釣”出并確證了兩種與BTas相互作用的細(xì)胞蛋白：干擾素誘導(dǎo)的35 KDa的蛋白(IFP35)和NF-kB旁路中重要的蛋白(RelB);2

3、.選擇IFP35進(jìn)行深入的功能探討,發(fā)現(xiàn)IFP35能夠通過其與BTas的相互作用抑制BTas介導(dǎo)的對(duì)BFV自身主要啟動(dòng)子LTR的反式激活作用,這種抑制作用依賴于其結(jié)構(gòu)的完整性；3.IFP35不但能夠抑制BFV的復(fù)制,亦能夠抑制PFV的復(fù)制；4.實(shí)驗(yàn)證實(shí)內(nèi)源性的IFP35對(duì)BFV的復(fù)制具有很強(qiáng)的抑制作用,由此推測(cè)IFP35可能是BFV在宿主細(xì)胞內(nèi)處于長(zhǎng)期潛伏的重要原因；5.在對(duì)IFP35進(jìn)行研究的基礎(chǔ)上,發(fā)現(xiàn)另一與IFP35具有相似結(jié)構(gòu)的

4、蛋白Nmi也能有效抑制BFV的復(fù)制,并證實(shí)Nmi不但能夠通過其與BTas的相互作用來抑制BTas介導(dǎo)的對(duì)BFV LTR的反式激活功能,還能抑制BTas對(duì)內(nèi)部啟動(dòng)子(IP)的反式激活作用,其抑制機(jī)理是通過與BTas相互作用后將BTas滯留在漿中而實(shí)現(xiàn)的；6.發(fā)現(xiàn)BTas能夠在體內(nèi)形成二聚體,并界定了其二聚化的區(qū)域?yàn)?6-62 aa;證實(shí)當(dāng)缺失了該二聚化區(qū)段后,雖然并不影響B(tài)Tas的核定位及其結(jié)合LTR和IP的能力,卻會(huì)使得BTas的反式激