流感病毒NP蛋白與宿主蛋白SNRPA的相互作用研究.pdf

1、流感病毒即流行性感冒病毒，是引起人類疾病和死亡的重要病原之一。流感病毒屬于正粘病毒科流感病毒屬，根據(jù)流感病毒核蛋白NP和基質(zhì)蛋白M1的抗原性差異，可將流感病毒分為A型、B型和C型。A型流感是一種家禽和野禽的高度接觸性急性傳染病，也可引起人類感染和死亡，是一種重大的人畜共患傳染病，嚴(yán)重影響畜牧業(yè)發(fā)展并對人類健康造成巨大的威脅。A型流感病毒基因組為8個片段的單股負(fù)鏈RNA，分別編碼不同的蛋白，其中，NP蛋白由第5片段編碼，是流感病毒主要的結(jié)

2、構(gòu)蛋白，能與病毒基因組RNA及RNA聚合酶三聚體(PB2、PB1、PA)結(jié)合構(gòu)成vRNP，參與vRNP的入核、出核以及病毒基因組的轉(zhuǎn)錄與復(fù)制。此外，NP能夠通過與多種宿主蛋白相互作用來完成對不同信號通路的調(diào)節(jié)，在病毒復(fù)制周期中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。NP互作蛋白的研究為病毒致病機理的深入探討以及進(jìn)一步研發(fā)抗流感病毒藥物提供科學(xué)依據(jù)。
　　本研究選取利用酵母雙雜交技術(shù)篩選到的與NP蛋白相互作用的宿主蛋白SNRPA作為研究對象，該蛋白是一

3、種剪接體蛋白，具有多種功能，能夠結(jié)合U1 snRNA的主干Ⅱ環(huán)，并在mRNA前體剪接和多聚的過程中發(fā)揮重要作用。SNRPA能夠與黃熱病毒的NS5蛋白相互作用，影響NS5蛋白的出入核。本研究首先進(jìn)行了酵母回交驗證試驗，證實NP和SNRPA在酵母系統(tǒng)中存在特異相互作用，進(jìn)而采用Co-IP和GSTpulldown試驗證實兩者在哺乳動物細(xì)胞中的互作，激光共聚焦試驗證實SNRPA能夠與NP蛋白共定位于A549細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中。通過siRNA干擾SN