豬瘟病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS5A與宿主蛋白的相互作用研究.pdf

1、病毒是簡單的、具有生態(tài)性的細(xì)胞內(nèi)寄生生物，其復(fù)制的全部過程都須依賴細(xì)胞提供的分子生態(tài)條件。病毒在宿主細(xì)胞復(fù)制增殖所需要的細(xì)胞內(nèi)分子環(huán)境條件，包括細(xì)胞基因組的結(jié)構(gòu)變化、表達(dá)調(diào)控以及宿主因子直接參與病毒的感染、復(fù)制的生命循環(huán)。
　　豬瘟病毒(classical swine fever virus，CSFV)是黃病毒科(Flaviviridae)瘟病毒屬(Pestivirus)重要成員，是有囊膜的單股正鏈RNA病毒。CSFV基因組編碼E

2、rns、E1、E2、C四個結(jié)構(gòu)蛋白和Npro、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B等八個非結(jié)構(gòu)蛋白。CSFV感染豬導(dǎo)致以出血性高熱和免疫抑制為主要特征、具有高發(fā)病率和高死亡率的烈性傳染病——豬瘟(classical swinefever，CSF)。目前，CSF仍是危害我國養(yǎng)豬業(yè)最為嚴(yán)重的傳染病。
　　為了鑒定與CSFV NS5A相互作用并參與CSFV復(fù)制的宿主蛋白，本研究利用重組表達(dá)載體pEGX-6p-NS

3、5AC誘導(dǎo)表達(dá)了NS5A碳端蛋白片段(NS5AC)，用重組蛋白GST-NS5AC與PK-15細(xì)胞裂解蛋白共孵育，pull down細(xì)胞蛋白，用質(zhì)譜分析鑒定相互作用的細(xì)胞蛋白;此外，構(gòu)建了重組真核表達(dá)載體pCMV-myc-NS5AC，轉(zhuǎn)染哺乳動物細(xì)胞PK-15，用免疫共沉淀和Western blot方法驗(yàn)證pull down、質(zhì)譜分析的結(jié)果。pull down和免疫共沉淀的結(jié)果均表明，宿主細(xì)胞熱休克蛋白27(HSP27)與CSFV NS5