牛泡沫病毒感染性克隆的構(gòu)建及附屬蛋白功能分析.pdf

1、泡沫病毒（foamy virus，F(xiàn)V）泛指反轉(zhuǎn)錄病毒科中泡沫病毒亞科的病毒，與人免疫缺陷病毒Ⅰ型（human immunodeficiency virus type1，HIV-1）和人T細(xì)胞白血病病毒(human T-cell leukemia virus，HTLV)的基因組結(jié)構(gòu)類(lèi)似，屬于復(fù)雜的反轉(zhuǎn)錄病毒。泡沫病毒具有獨(dú)特的進(jìn)化地位、潛在的致病性及可能改建為優(yōu)良的基因轉(zhuǎn)移載體等特點(diǎn)，近年逐漸引起各國(guó)疾病防控機(jī)構(gòu)及從事病毒學(xué)及免疫學(xué)基礎(chǔ)

2、研究學(xué)者的重視。學(xué)界對(duì)靈長(zhǎng)類(lèi)泡沫病毒的研究較為深入，對(duì)于非靈長(zhǎng)類(lèi)泡沫病毒的研究相對(duì)膚淺，主要涉及貓泡沫病毒(feline foamy virus，F(xiàn)FV)和牛泡沫病毒（bovine foamy virus，BFV）。
　　我室在上世紀(jì)九十年代自主分離到一株中國(guó)株牛泡沫病毒3026(BFV strain3026，BFV3026)，隨之對(duì)其基因功能及其與宿主關(guān)系開(kāi)展系列研究。本文以經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)室長(zhǎng)期培養(yǎng)的BFV3026為出發(fā)材料，構(gòu)建多株

3、BFV3026原病毒全長(zhǎng)基因組DNA感染性克隆(pBS-BFV)，篩選獲得了高復(fù)制活性的感染性克隆(pBS-BFV-B);通過(guò)與實(shí)驗(yàn)室前期獲得的低活性基因組全長(zhǎng)DNA克隆(pBS-BFV-Y)進(jìn)行基因嵌合比較，對(duì)影響該病毒復(fù)制活性的關(guān)鍵因素進(jìn)行了分析:發(fā)現(xiàn)BFV附屬蛋白BTas的反式激活的能力與pBS-BFV的復(fù)制水平密切相關(guān);分子機(jī)制探究結(jié)果顯示:其第108位氨基酸是DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域中的關(guān)鍵氨基酸之一，Asp108突變?yōu)锳sn顯著增強(qiáng)

4、BTas蛋白與Tas應(yīng)答元件（Tas-responsive element，TRE）的相互作用，提高了BTas蛋白反式激活能力，是該感染性克隆具有高復(fù)制活性的主要原因;隨之，使用穩(wěn)定整合BFVLTR-GFP的BFV指示細(xì)胞系(BFV indicator cell line，BICL)進(jìn)行了cell-freeBFV3026篩選實(shí)驗(yàn)，獲得了cell-free BFV3026感染性病毒顆粒，滴度約為1×104TCIDso/mL;最后，對(duì)病毒另

5、一附屬蛋白BBet的功能進(jìn)行反向遺傳學(xué)研究:證實(shí)BBet蛋白在BFV3026早期具有負(fù)調(diào)控功能。
　　本研究獲得的高活性BFV3026感染性克隆及cell-free的BFV3026毒株，為深入研究BFV3026的分子生物學(xué)特征及構(gòu)建基因轉(zhuǎn)移載體準(zhǔn)備了良好的實(shí)驗(yàn)材料;利用反向遺傳學(xué)方法，在病毒水平探索了BFV3026附屬蛋白BTas和BBet在病毒復(fù)制過(guò)程中的功能，為深入解析BFV的附屬基因的功能及其對(duì)復(fù)制特征影響提供了重要實(shí)驗(yàn)依據(jù)