枯草芽孢桿菌B11菌株分泌的拮抗物質(zhì)的純化及基因文庫的構(gòu)建.pdf

1、　　從土壤中分離得到的枯草芽孢桿菌B11菌株對西瓜枯萎病菌有較強的抑制作用，其抑制機制之一是產(chǎn)生拮抗物質(zhì)。本研究對B11菌株分泌的拮抗物質(zhì)進行純化，測定其特性及抑菌機制，并構(gòu)建B11菌株的基因文庫，取得的結(jié)果如下：　　通過煮沸、DEAE52陰離子交換層析和氧化鋁吸附層析，將B11菌株分泌的兩種拮抗物質(zhì)(拮抗物質(zhì)A、B)純化到薄層層析斑點純?！　煞N拮抗物質(zhì)對蛋白酶K和胃蛋白酶穩(wěn)定，拮抗物質(zhì)A對胰蛋白酶也穩(wěn)定，但拮抗物質(zhì)B對胰蛋白酶部

2、分敏感。這兩種拮抗物質(zhì)均能耐高溫，在121℃仍能保持活性不變?！　煞N拮抗物質(zhì)對尖孢鐮刀菌西瓜專化型、水稻黃單胞菌水稻變種13751菌株、茄青枯拉爾氏菌P13菌株和水稻紋枯病菌均有較強烈的抑制作用，但拮抗物質(zhì)A對水稻稻灰梨孢菌沒有抑制作用；而拮抗物質(zhì)B對水稻稻灰梨孢菌有較強烈的抑制作用?！　∮霉鈱W顯微鏡觀察拮抗物質(zhì)A、B對尖孢鐮刀菌西瓜?；头稚咦拥淖饔?，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，拮抗物質(zhì)A處理尖孢鐮刀菌西瓜?；?V/V=30/100)分生孢子

3、12h后，有40﹪的分生孢子不能萌發(fā)，并出現(xiàn)畸形，24h后全部畸形，48h后可以致使分生孢子膨大和原生質(zhì)濃縮；而拮抗物質(zhì)B處理分生孢子36h后即可使分生孢子膨大和原生質(zhì)濃縮?！　∮卯a(chǎn)生平頭末端的EcoRV酶對枯草芽孢桿菌B11菌株的總DNA進行酶切，末端補平后回收大于48Kb的DNA片段，與cosmid載體連接，連接產(chǎn)物用包裝蛋白包裝后侵染大腸桿菌EPI100，構(gòu)建了約6700個克隆的DNA文庫。從文庫中隨機挑選10個克隆提取質(zhì)粒，質(zhì)