紅鰭笛鯛GH、IGF I基因的克隆與GH基因的真核表達(dá).pdf

1、生長激素(Growth Hormone，GH)是由脊椎動物下丘腦分泌的單鏈多肽激素，魚類生長激素參與魚體的生長、發(fā)育和代謝等；胰島素樣生長因子(Insulin-like growthfactor I.IGF I)是一類多功能細(xì)胞增殖調(diào)控因子，由胰腺分泌合成，在細(xì)胞的分化、增殖、個體的生長發(fā)育中具有重要的促進(jìn)作用。這兩種因子魚類體內(nèi)天然含量極低，分離純化比較困難，基因工程技術(shù)為生產(chǎn)大量廉價的魚生長激素創(chuàng)造了條件。重組魚類生長激素具有天然生

2、長激素同樣的功能，在養(yǎng)殖方面，多種魚類生長激素制劑及飼料得到應(yīng)用，因此，生產(chǎn)基因重組魚生長激素在魚類養(yǎng)殖方面具有重要的經(jīng)濟(jì)價值。本論文成功獲得了紅鰭笛鯛生長激素基因以及胰島素樣生長因子基因的全序列，實現(xiàn)了紅鰭笛鯛生長激素(Lutjanus erythopterus GH)在畢赤酵母(Pichia pastoris)中的分泌表達(dá)，通過重組生長激素畢赤酵母投喂羅非魚驗證了重組生長激素的促魚類生長作用。
　　(1)紅鰭笛鯛GH基因和IG

3、FⅠ基因的獲得
　　在Gen Bank中下載相近種GH和IGFⅠ基因序列，在保守區(qū)設(shè)計兩種基因的合適引物，PCR擴(kuò)增后分別克隆測序獲得GH和IGFⅠ部分序列，得到GH編碼區(qū)序列467bp，IGF編碼區(qū)部分序列506bp，采用特定接頭，將模板3’和5’分別延長，將接頭引物和所設(shè)計的引物配對進(jìn)行槽式PCR擴(kuò)增、克隆純化最后測序得到它們的3’RACE和5’RACE序列。用Congtig Express進(jìn)行拼接后得到這兩個基因全序列，最后

4、在線分析其基因組成。GH基因全長787bp，其中5’端非編碼區(qū)長19bp，編碼區(qū)長615bp，3’非編碼區(qū)長153bp，提交至Gen Bank登錄號為：JQ346228；IGFⅠ基因全長1132bp，其中5’端非編碼區(qū)長134bp，編碼區(qū)長558bp，3’非編碼區(qū)長460bp，提交至Gen Bank登錄號為：JN383435。
　　(2)紅鰭笛鯛GH在畢赤酵母中的表達(dá)及重組畢赤酵母促生長作用
　　將紅鰭笛鯛GH編碼區(qū)cDNA