球孢蟲(chóng)草(Cordyceps bassiana)生物學(xué)特性及活性成分研究.pdf

1、本文以球孢蟲(chóng)草為實(shí)驗(yàn)材料，利用菌種分離技術(shù)、PCR、高效液相色譜等技術(shù)和化學(xué)手段，對(duì)球孢蟲(chóng)草的生物學(xué)特性和化學(xué)成分進(jìn)行了研究，主要包括以下內(nèi)容：球孢蟲(chóng)草無(wú)型性確定和生活史驗(yàn)證，液體深層發(fā)酵條件及人工栽培條件優(yōu)化，球孢蟲(chóng)草中蛋白質(zhì)、氨基酸、甘露醇、多糖和核苷類物質(zhì)的研究及多糖和小分子物質(zhì)的活性測(cè)定。研究結(jié)果如下： 1.球孢蟲(chóng)草無(wú)型性確定和生活史驗(yàn)證：采用形態(tài)學(xué)鑒定和分子生物學(xué)鑒定相結(jié)合，確定了球孢蟲(chóng)草的無(wú)型性為球孢白僵菌。在此基礎(chǔ)

2、上對(duì)球孢白僵菌進(jìn)行了生活史驗(yàn)證，從而有力的證明了球孢蟲(chóng)草與球孢白僵菌是同一物種的不同生長(zhǎng)階段，球孢蟲(chóng)草是有型性，而球孢白僵菌為無(wú)型性。 2.液體深層發(fā)酵條件及人工栽培條件優(yōu)化：以EPS和菌絲體生物量為指標(biāo)，由單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)確定了該菌株液體發(fā)酵最佳培養(yǎng)基的組成為：蔗糖25‰、蛋白胨39‰，(NH4)2SO41.5‰、K2HPO41.5‰、MgSO40.5‰；由單因素實(shí)驗(yàn)確定了液體發(fā)酵條件為：初始pH7.0、溫度26℃、裝液量

3、75mL/250mL、接種量5％、培養(yǎng)時(shí)間3d。在最佳的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件下，該菌株產(chǎn)EPS量高達(dá)1.8279/L，菌絲體生物量達(dá)2.1359/100mL。 以子實(shí)體質(zhì)量和產(chǎn)量為指標(biāo)，由單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)，確定了人工栽培的最佳條件為：麥粒為原料，含水量70％，培養(yǎng)溫度22～24℃，PH值7.0。 3.活性成分分析：研究發(fā)現(xiàn)，球孢蟲(chóng)草子座和菌絲體中蛋白質(zhì)含量分別為：35.32％、24.05％，低于野生冬蟲(chóng)夏草，但氨基酸含量

4、高于冬蟲(chóng)夏草，分別為25.96％、16.51％；球孢蟲(chóng)草菌絲體中甘露醇含量高達(dá)12.05％，高于子座和野生冬蟲(chóng)夏草。 采用GC和HPLC分別測(cè)定了球孢蟲(chóng)草多糖的單糖組成和核苷類物質(zhì)的含量及組成，結(jié)果表明，球孢蟲(chóng)草胞外多糖(EPS)由甘露糖和半乳糖組成，摩爾比是1.2:1.0；胞內(nèi)多糖(IPS)由甘露糖、半乳糖和葡萄糖組成，摩爾比為5.4:4.0:1.0。球孢蟲(chóng)草子座與發(fā)酵菌絲體中均含有鳥(niǎo)苷、腺苷和尿苷三種成分，且發(fā)酵菌絲體中三者

5、的含量高于子座及野生冬蟲(chóng)夏草。通過(guò)五種活性成分測(cè)定，為綜合評(píng)價(jià)球孢蟲(chóng)草內(nèi)在品質(zhì)和開(kāi)發(fā)球孢蟲(chóng)草提供了科學(xué)依據(jù)。 4.活性測(cè)定：通過(guò)對(duì)多糖體外抗氧化活性研究發(fā)現(xiàn)：IPS具有清除DPPH·、·OH、·O2－和螯合Fe2+的作用，有強(qiáng)的還原力；EPS僅可以清除·OH，螯合Fe2+，對(duì)DPPH·和·O2－均沒(méi)有清除作用，也沒(méi)有還原力。IPS和EPS對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌的抑菌效果較好，對(duì)革蘭氏陰性菌基本沒(méi)有抑菌作用；乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物對(duì)