抱雌溝蛋白篩選日本血吸蟲成蟲噬菌體展示cDNA文庫的研究.pdf

1、血吸蟲病(Schisosomiasis)是由血吸蟲寄生于人體所引起的一種分布廣泛、危害嚴(yán)重的人獸共患寄生蟲病。血吸蟲是吸蟲中罕見的雌雄異體形式，在血吸蟲發(fā)育過程中，雌雄蟲合抱是雌蟲發(fā)育成熟的前提，雌雄蟲間信息物質(zhì)的傳遞通過合抱實現(xiàn)。因此，如果能夠找出這種雌雄蟲間傳遞的信息物質(zhì)，對研究血吸蟲雌雄蟲之間的相互作用、血吸蟲生殖發(fā)育機理以及對抗血吸蟲疫苗研究有非常重要的意義。噬菌體展示技術(shù)是新近發(fā)展起來的，將外源肽或蛋白與特定噬菌體衣殼蛋白融合

2、，并展示于噬菌體表面的一項新技術(shù)，已廣泛應(yīng)用于分子間識別機制的研究。 本研究用融合表達(dá)的日本血吸蟲抱雌溝蛋白篩選日本血吸蟲成蟲噬菌體展示cDNA文庫，隨機選取獲得的陽性噬菌體克隆進(jìn)行測序、生物信息學(xué)分析，并對其中部分陽性克隆進(jìn)行了免疫預(yù)防效果評估。 經(jīng)過三輪篩選后，噬菌體由第一輪的1.8×10-6pfu增加到第三輪的1.6×10-4pfu，富集了將近90倍，成功的篩除了低親和力和非特異性結(jié)合的噬菌體。隨機挑取陽性噬菌體克

3、隆進(jìn)行測序以及生物信息學(xué)分析，共獲得25個有效EST序列，其中20個與已知基因或表達(dá)序列標(biāo)簽同源，5個EST序列與已知基因或表達(dá)序列標(biāo)簽均無同源性，為新的表達(dá)序列標(biāo)簽。對20個有效編碼蛋白的功能預(yù)測結(jié)果顯示：10個EST序列為卵殼蛋白相關(guān)基因與血吸蟲卵的發(fā)育相關(guān)，3個EST序列為核糖體蛋白相關(guān)編碼基因序列，7個EST序列編碼蛋白與信號受體顆粒的亞基同源。 將篩選得到的陽性噬菌體克隆進(jìn)行功能分組后，選擇5種噬菌體展示抗原，以每只1

4、013pfu免疫BALB/c小鼠并攻擊感染日本血吸蟲尾蚴。結(jié)果顯示：展示日本血吸蟲SJCHGC06360蛋白(19號克隆)噬菌體免疫組和展示兩種未知蛋白噬菌體(6號克隆和18號克隆)聯(lián)合免疫組獲得了顯著的免疫預(yù)防效果，分別誘導(dǎo)了40.53％和31.14％的減蟲率、35.31％和44.65％的肝臟減卵率。抗體水平檢測結(jié)果顯示：免疫組均取得了較高的特異性抗體。 本項研究首次用日本血吸蟲抱雌溝蛋白篩選日本血吸蟲成蟲噬菌體展示cDNA文