血常規(guī)尿常規(guī)白帶常規(guī)血型檢測(cè)的操作規(guī)范及質(zhì)量控制

1、孕前優(yōu)生血、尿、血型及陰道分泌物檢測(cè)---操作規(guī)范＆質(zhì)量控制,,內(nèi)容提要,血液學(xué)檢驗(yàn)的操作規(guī)范及質(zhì)量控制尿常規(guī)檢測(cè)的操作規(guī)范及質(zhì)量控制陰道分泌物檢測(cè)的操作規(guī)范及質(zhì)量控制ABO血型檢測(cè)的操作規(guī)范及質(zhì)量控制,血液學(xué)檢驗(yàn)的操作規(guī)范及質(zhì)量控制,概述血液學(xué)檢測(cè)的操作規(guī)范血液學(xué)檢測(cè)的質(zhì)量控制危機(jī)值報(bào)告,一、概述,發(fā)展歷程 由手工操作進(jìn)入半自動(dòng)儀計(jì)數(shù)，再進(jìn)入全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀測(cè)定，直到目前的全自動(dòng)血細(xì)胞分析流水線這個(gè)里程碑

2、式的歷程，見(jiàn)證了血常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)的進(jìn)步。,概念 血液的一般檢查（血常規(guī)檢查)：是對(duì)血液中的有形成分（紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板）的數(shù)量和質(zhì)量進(jìn)行檢測(cè)。包括全血細(xì)胞計(jì)數(shù)和白細(xì)胞的分類計(jì)數(shù)。,三分類與五分類：儀器檢測(cè)原理 三分類大都采用電阻抗檢測(cè)技術(shù)；五分類的產(chǎn)品大 都采用光散射檢測(cè)技術(shù)。白細(xì)胞分類方法 三分群是將白細(xì)胞分為淋巴細(xì)胞，單核細(xì)胞，粒細(xì)胞；五分群則是將白細(xì)胞分為淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、粒細(xì)胞（中性細(xì)胞、嗜

3、酸性細(xì)胞、嗜堿性細(xì)胞）。,二、血液學(xué)檢測(cè)的操作規(guī)范,2. 三分類原理——電阻抗法,在待測(cè)液體中置一微孔，在微孔的兩端各加一定電壓的電極，當(dāng)液體中的顆粒經(jīng)過(guò)微孔時(shí)，電極間的電阻就會(huì)產(chǎn)生訓(xùn)瞬間的變化，因而產(chǎn)生電脈沖，對(duì)這種電脈沖進(jìn)行計(jì)數(shù)就可得到顆粒的數(shù)量，脈沖幅度的大小表示顆粒的體積的大小，經(jīng)過(guò)對(duì)各種細(xì)胞所產(chǎn)生脈沖的大小的電子的選者擇，可以區(qū)分出不同種類的細(xì)胞；在液體中加上一定的負(fù)壓就能使經(jīng)過(guò)微孔的液體流動(dòng),3. 五分類檢測(cè)原理,容量、傳導(dǎo)

4、、光散射分類法（VCS）阻抗、射頻和特殊稀釋液處理的聯(lián)合分類多角度偏振光三色分類法（MAPSS）光散射與細(xì)胞化學(xué)技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用分類法利用激光流式細(xì)胞分析系統(tǒng)加核酸熒光染色技術(shù)分類法,4. 操作規(guī)程,開(kāi)機(jī)后先做質(zhì)控，質(zhì)控通過(guò)后進(jìn)行樣本檢測(cè)將合格樣本編號(hào)，待檢標(biāo)本檢測(cè)1.上下顛倒試管將內(nèi)容物充分混勻，檢查有無(wú) 凝血。2.將試管正確放入試管架上。3.按start鍵，樣品開(kāi)始吸取。4.當(dāng)ready led 暗（并發(fā)出兩聲短音）

5、移開(kāi)試管。5.當(dāng)ready led再次亮起時(shí)，準(zhǔn)備下一個(gè)樣品，重復(fù)上述步驟。,5.鏡檢篩選,為了保證血液分析結(jié)果準(zhǔn)確，鏡檢是細(xì)胞形態(tài)分析的最終手段。2005年國(guó)際血液學(xué)復(fù)檢專家組經(jīng)詳細(xì)分析后，制定了41條指導(dǎo)性自動(dòng)血細(xì)胞分析和分類的復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)。三分群血液分析儀：100%顯微鏡WBC分類及血細(xì)胞形態(tài)檢查。,三、血液學(xué)檢測(cè)的質(zhì)量控制,分析前質(zhì)量控制分析中質(zhì)量控制分析后質(zhì)量控制,四、危機(jī)值報(bào)告,RBC ≤2.5×1012/L

6、 HGB＜50g/L 或＞250g/LPLT＜ 30×109/L或＞600×109/LWBC＜2.0×109/L或＞28.0×109/L,,尿常規(guī)檢測(cè)的操作規(guī)范及質(zhì)量控制,,尿液檢驗(yàn)的流程尿液干化學(xué)檢查尿沉渣顯微鏡檢查,一、尿液檢驗(yàn)流程,二、尿液干化學(xué)檢查,（一）尿液干化學(xué)分析的發(fā)展1956年：美國(guó)人Ames和Lilly發(fā)明了尿糖干化學(xué)試帶1957年：利用“蛋白質(zhì)誤差”的原理推

7、出尿蛋白檢測(cè)試帶，1958年：推出尿糖、尿蛋白二聯(lián)試帶1959年：推出尿糖、尿蛋白、尿pH三聯(lián)試帶20世紀(jì)70年代：第一臺(tái)干化學(xué)分析儀問(wèn)世 ——現(xiàn)代尿液分析自動(dòng)化的標(biāo)志試帶逐步發(fā)展到多項(xiàng)，八聯(lián)、十聯(lián)、十一聯(lián)、十二聯(lián)從目測(cè)發(fā)展到自動(dòng)化儀器檢測(cè)，由半自動(dòng)化到全自動(dòng)化 國(guó)產(chǎn)試劑代替進(jìn)口試劑。,（二）尿干化學(xué)分析儀分類,按自動(dòng)化程度 1.半自動(dòng)尿液分析儀： 2.全自動(dòng)尿液分析儀：按

8、檢測(cè)項(xiàng)目8項(xiàng)：pH、PRO、GLU、KET、 BIL、URO、BLD、NIT 10項(xiàng)：8項(xiàng) + LEU、SG 11項(xiàng)：10項(xiàng) + VitC 12項(xiàng)：10項(xiàng) + 顏色、透明度,（三）尿液分析儀的原理尿液分析儀的測(cè)試原理主要有以下三個(gè)方面尿液分析儀的試劑帶原理尿液分析儀測(cè)量原理尿液分析儀計(jì)算原理,（四）尿干化學(xué)試劑帶的使用規(guī)范操作人員必須仔細(xì)閱讀試帶性能和儀器的操作方法；操作中應(yīng)充分混勻新鮮尿液標(biāo)本；將試

9、帶全部迅速浸入尿液標(biāo)本；試帶從標(biāo)本中取出時(shí)，除去多余的尿液可疑結(jié)果必須進(jìn)行確診實(shí)驗(yàn)；干化學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)與理學(xué)、顯微鏡結(jié)果相關(guān)聯(lián)。不能丟掉鏡檢,（五）尿干化學(xué)檢測(cè)的質(zhì)量控制,分析前質(zhì)量控制人員培訓(xùn)建立標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程尿液標(biāo)本的采集及保存儀器設(shè)備定期校準(zhǔn)和保養(yǎng)尿試紙的正確使用質(zhì)控品的選擇,三、尿沉渣顯微鏡檢查,尿沉渣檢測(cè)是對(duì)尿液離心沉淀物中有形成分的鑒定。傳統(tǒng)的尿沉渣檢測(cè)包括用顯微鏡對(duì)尿沉渣進(jìn)行定性、定量檢查以及各種有形成分

10、的計(jì)數(shù)檢測(cè)；現(xiàn)在可用尿液分析儀(試紙條法)及尿沉渣自動(dòng)分析儀，對(duì)尿中某些有形成分進(jìn)行自動(dòng)檢測(cè)。,尿液顯微鏡檢測(cè),方 法取混勻新鮮晨尿10ml，1500rpm離心5min，留沉淀物0.25-0.35ml混勻取50 ?l涂片以弱光低倍鏡觀察，用高倍鏡辨認(rèn)記錄各類細(xì)胞或各類管型在10個(gè)視野內(nèi)所見(jiàn)到的最低和最高數(shù)目,紅細(xì)胞尿沉渣中不染色紅細(xì)胞典型形狀為淺黃色雙凹盤狀。但受PH、滲透壓及紅細(xì)胞來(lái)源的影響，可發(fā)生變化。堿性尿中紅細(xì)胞邊緣

11、不規(guī)則，高滲尿中紅細(xì)胞因脫水皺，呈表面帶刺、顏色較深的桑葚狀；低滲尿中紅細(xì)胞因吸水脹大，并可有血紅蛋白逸出，呈大小不等的空環(huán)形，稱紅細(xì)胞淡影。參考值：正常平均每高倍視野0-3個(gè)，>3個(gè)/HP稱鏡下血尿。定量檢查0-5個(gè)/μL。,尿液中主要的有形成分,白細(xì)胞和膿細(xì)胞白細(xì)胞外形完整，分散存在，以中性粒細(xì)胞多見(jiàn)。膿細(xì)胞是指在炎癥過(guò)程中破壞或死亡的中性粒細(xì)胞，外形不規(guī)則，常成堆聚集存在。參考值：正常平均0-5個(gè)/高倍視野，定量檢查0

12、-10個(gè)/μL,上皮細(xì)胞：尿液中上皮細(xì)胞來(lái)自腎至尿道的整個(gè)泌尿系統(tǒng)，包括腎小管上皮細(xì)胞、移行上皮細(xì)胞和復(fù)層扁平上皮細(xì)胞。,管型尿液中的蛋白在腎小管內(nèi)凝集而成，尿內(nèi)出現(xiàn)管型是腎實(shí)質(zhì)病變的證據(jù)。如急性腎小球腎炎多見(jiàn)透明管型和顆粒管型，慢性腎小球腎炎多見(jiàn)細(xì)、粗顆粒管型；在慢性腎炎，腎病綜合癥，高血壓腎損傷時(shí)可見(jiàn)透明管型增多。,結(jié)晶,尿中出現(xiàn)結(jié)晶稱晶體尿。尿液中是否析出結(jié)晶。取決于某些物質(zhì)在尿液中的溶解度、濃度、pH、溫度及膠體狀況等因素

13、。當(dāng)種種促進(jìn)與抑制結(jié)晶折出的因子和使尿液過(guò)飽和狀態(tài)維持穩(wěn)定動(dòng)態(tài)平衡的因素失衡時(shí)，則可見(jiàn)結(jié)晶折出。,報(bào)告方式,分?jǐn)?shù)報(bào)告法 細(xì)胞成分： 最低 ~ 最高/HPF 管型成分： 最低 ~ 最高/LPF加號(hào)報(bào)告法以有形成分占視野面積來(lái)判定，1/4視野為+，滿視野為++++。多用于細(xì)胞數(shù)極多和結(jié)晶、粘液絲、脂肪滴、細(xì)菌等的報(bào)告。定量報(bào)告法 （ /ml /ul）,質(zhì)量控制,標(biāo)本量應(yīng)達(dá)到10ml，離心速度在1

14、500 r/min ，5min。細(xì)胞等有形成分較多時(shí)，應(yīng)在載玻片上選擇較薄處進(jìn)行檢查，防止因遮蓋漏報(bào)或少報(bào)。觀察管型時(shí)光線不能太強(qiáng)，避免透明管型的漏檢。,陰道分泌物檢測(cè)的操作規(guī)范及質(zhì)量控制,概述標(biāo)本采集及處理陰道分泌物檢查的規(guī)范化程序質(zhì)量控制,一、概述,女性生殖系統(tǒng)分泌的液體，俗稱“白帶”，主要是由宮頸腺體和前庭大腺的分泌物組成，也含有來(lái)自子宮內(nèi)膜和陰道黏膜的分泌物。常用于女性生殖系統(tǒng)炎癥、腫瘤的診斷及雌激素水平的判斷。,二

15、、標(biāo)本的采集及處理,常由婦產(chǎn)科醫(yī)師給檢驗(yàn)對(duì)象采集，取材后，棉拭子放于生理鹽水試管內(nèi)。制成生理鹽水涂片固定、染色,患者準(zhǔn)備：在采集標(biāo)本前24小時(shí)內(nèi)應(yīng)無(wú)性交、無(wú)盆浴、無(wú)陰道灌洗、近期內(nèi)未服用激素類藥物。標(biāo)本要求：用無(wú)菌棉拭子從陰道后穹隆處取分泌物；所用窺陰器不可用潤(rùn)滑劑，只能用少量無(wú)菌等滲鹽水潤(rùn)濕。標(biāo)本儲(chǔ)存：取材后應(yīng)立刻檢查，避免因放置時(shí)間太久影響滴蟲(chóng)的活動(dòng)性或蟲(chóng)體受到破壞使檢查結(jié)果受到影響。 標(biāo)本運(yùn)輸：一般室溫運(yùn)輸，如冬季氣溫較

16、低應(yīng)注意保溫運(yùn)輸。,三、陰道分泌物檢查的規(guī)范化程序,1. 一般性狀檢查：外觀檢查：正常陰道分泌物為白色稀糊狀，無(wú)氣味，其量多少與雌激素水平高低和生殖器官充血程度有關(guān)。PH值：在生理情況下，由于陰道桿菌的作用使正常健康婦女陰道pH<5.0。 【參考值】pH 4.0～4.5,一般性狀檢查,陰道清潔度檢查,【檢測(cè)方法】,①涂片,②高倍鏡,③觀察判斷陰道清潔度,,,,,,,,,,,2. 顯微鏡檢查,濕片檢查,,,a.NS1滴,,,b

17、.標(biāo)本涂抹混勻,,分級(jí),,,微生物及寄生蟲(chóng)檢查滴蟲(chóng) 主要是陰道毛滴蟲(chóng)，致滴蟲(chóng)性陰道炎。檢測(cè)采用生理鹽水懸滴法或濕片法，滴蟲(chóng)呈梨形，后端尖，約為白細(xì)胞的2～3倍大小。低倍顯微鏡下可見(jiàn)波動(dòng)狀或螺旋狀運(yùn)動(dòng)。,,真菌 采用懸滴法于低倍鏡下可見(jiàn)到白色絲假酵母菌的卵圓形孢子和假菌絲。如取陰道分泌物涂片并時(shí)行革蘭氏染色后油觀察，可見(jiàn)芽孢、孢子或與出芽細(xì)胞相連接的菌絲，成鏈狀及分支狀。,陰道加德納菌 陰道加德納菌為革蘭氏染色陰性或染色不

18、定小桿菌。大小為1.5-2.5μm，具有多形性，呈桿狀或球桿狀，致陰道分泌物PH＞4.5，胺試驗(yàn)陽(yáng)性。,淋球菌 革蘭氏染色陰道性雙球菌，形似腎或咖啡豆?fàn)?，凹面相?duì)，除散在于白細(xì)胞之間外，還可見(jiàn)其被吞噬于中性粒細(xì)胞胞質(zhì)之內(nèi)，因淋病奈瑟菌對(duì)各種理化因子抵抗力弱，涂片法可被漏診，必要時(shí)可進(jìn)行淋病奈瑟菌培養(yǎng)，且有利于菌株分型和藥過(guò)敏試驗(yàn)。,四、質(zhì)量控制,結(jié)果報(bào)告應(yīng)全面，符合規(guī)范；首先報(bào)告陰道分泌物清潔度，其次報(bào)告所發(fā)現(xiàn)的病原微生物。分析

19、檢測(cè)結(jié)果之間的關(guān)聯(lián)性。檢驗(yàn)報(bào)告的審核、簽發(fā)、登記。,ABO血型檢測(cè)的操作規(guī)范及質(zhì)量控制,概述ABO血型鑒定的標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程ABO血型檢測(cè)的質(zhì)量控制常見(jiàn)的問(wèn)題,一、概述,血型的概念血型(blood group)是人體血液的一種遺傳性狀。20世紀(jì)初發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞ABO血型系統(tǒng)以來(lái)，血型的概念僅指紅細(xì)胞表面抗原的差異。隨著對(duì)血型研究的進(jìn)展，白細(xì)胞、血小板和血清中血型抗原的發(fā)現(xiàn)，血型已被認(rèn)為是指各種血液成分的遺傳多態(tài)性標(biāo)記 。,Karl

20、 Landsteiner奧地利科學(xué)家1901年發(fā)現(xiàn)人類ABO血型系統(tǒng),二、標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程,方法一：玻片法試驗(yàn)原理：根據(jù)紅細(xì)胞上有或無(wú)A抗原或/和B抗原，將血型分為A型、B型、AB型及O型四種。A型紅細(xì)胞膜上含有A抗原，B型紅細(xì)胞膜上含有B抗原，AB型紅細(xì)胞膜上含有A、B抗原，抗A、抗B試劑是分別針對(duì)A抗原和B抗原的特異性抗體?？衫眉t細(xì)胞凝集試驗(yàn)，通過(guò)正、反定型準(zhǔn)確鑒定ABO血型。適用范圍：初篩血型或普通體檢,操作步驟：取清潔

21、玻片1張（或白瓷板1塊），用肥皂水刷洗后晾干，用蠟筆劃出小格，并注明A、B字樣。將抗A試劑、抗B試劑各一滴分別滴于玻片（或瓷盤）上A、B處。分別取等體積待檢血樣（5％-10％紅細(xì)胞懸液或全血）于抗A試劑和抗B試劑。另取潔凈玻片1張（或白瓷板1塊），用記號(hào)筆劃成方格，標(biāo)明A細(xì)胞、B細(xì)胞和O細(xì)胞，用滴管各加受檢者血清1滴，再分別用滴管滴加A、B和O型試劑紅細(xì)胞懸液1滴。用不同的竹簽將分型試劑與待檢血樣調(diào)勻，同時(shí)不停的搖動(dòng)玻片（或瓷盤）并

22、觀察血型凝集（或溶血）反應(yīng)。如以玻片做試驗(yàn)時(shí)，也可用低倍鏡觀察結(jié)果。,方法二：試管法試驗(yàn)原理：根據(jù)紅細(xì)胞上有或無(wú)A抗原或/和B抗原，將血型分為A型、B型、AB型及O型四種?？衫眉t細(xì)胞凝集試驗(yàn)，通過(guò)正、反定型準(zhǔn)確鑒定ABO血型。正定型，是用已知的抗A、抗B分型血清來(lái)測(cè)定紅細(xì)胞膜上有無(wú)相應(yīng)的A抗原或/和B抗原所謂；反定型是用已知A細(xì)胞和B細(xì)胞來(lái)測(cè)定血清中有無(wú)相應(yīng)的抗A或/和抗B。試劑：抗A、抗B分型標(biāo)準(zhǔn)血清（單克隆抗體）

23、 2﹪～4﹪A1型、B型和O型試劑紅細(xì)胞懸液受檢者新鮮血清受檢者2﹪～4﹪紅細(xì)胞鹽水懸液,操作步驟：1.取潔凈試管2支，分別標(biāo)記：編號(hào)、抗A抗B2.分別加抗A、抗B分型血清各2滴于試管底部，再以吸管分別加入受檢者2﹪～4﹪紅細(xì)胞鹽水懸液1滴，混合3.取潔凈試管3支，分別標(biāo)記：編號(hào)、AC、BC、OC4.用吸管分別加入受檢者血清2滴于試管底部，再分別加入2﹪～4﹪A1型、B型和O型試劑紅細(xì)胞懸液1滴，混合。5.取潔凈試管1支，

24、標(biāo)記:編號(hào)、自身6.用試管分別加入受檢者血清2滴和受檢者紅細(xì)胞懸液1滴混合。7.離心：根據(jù)試劑說(shuō)明書選擇離心轉(zhuǎn)速和。8.待離心機(jī)停止后，取出試驗(yàn)管，肉眼觀察有無(wú)溶血現(xiàn)象，然后將試管輕輕搖動(dòng)，使沉于管底的紅細(xì)胞再懸浮，觀察凝聚強(qiáng)度，必要時(shí)以低倍鏡觀察結(jié)果時(shí)間,方法三：微柱凝膠法原理：在微柱凝膠介質(zhì)中，紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，利用凝膠的空間位阻，經(jīng)低速離心，凝集的紅細(xì)胞懸浮在凝膠上層，而未和抗體結(jié)合的紅細(xì)胞則沉于凝膠低部（管底尖部

25、）。,微柱凝膠結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn),三、ABO血型檢測(cè)的質(zhì)量控制,人員培訓(xùn)、考核標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程儀器性能的評(píng)估實(shí)驗(yàn)室內(nèi)溫濕度、冰箱狀態(tài)等外部供應(yīng)的評(píng)估（試劑、耗材等）室內(nèi)質(zhì)控室間質(zhì)評(píng)結(jié)果審核臨床溝通,四、ABO血型鑒定中常見(jiàn)問(wèn)題,工作中經(jīng)常遇到血型鑒定錯(cuò)誤或正反定型不符的情況，除了個(gè)別疑難血型出現(xiàn)的技術(shù)上的原因外，更多的是由于標(biāo)本的采集、離心、判讀等非技術(shù)因素造成血型鑒定結(jié)果錯(cuò)誤，很可能而發(fā)生重大的醫(yī)療差錯(cuò)或事故。,血型鑒定操作的