梅毒螺旋體抗體的

1、梅毒螺旋體抗體的檢測原理和臨床意義,裴娟,問題及概述,實驗室檢測注意事項及臨床意義 ? 梅毒實驗室檢測策略探討,問題-1,下列哪些說法是錯的？① 一旦感染梅毒，TPPA常終身陽性 ② TPPA可用于療效判斷 ③梅毒孕婦所生嬰兒RPR和TPPA檢測結(jié)果陽性 可診斷為胎傳梅毒 ④ RPR只能用于梅毒初篩,問題-1（續(xù)）,下列哪些說法是錯的？ ⑤ ELISA法不能用于初篩 ⑥核酸檢測方法可以用于梅毒的血液標(biāo)本檢

2、測 ⑦二期梅毒時，TPPA和RPR兩種血清學(xué)試驗敏感性均 可達100％,問題-2,開展RPR/TRUST試驗時應(yīng)采用下面哪種儀器或方法進行抗原抗體凝集反應(yīng)：① 水平旋轉(zhuǎn)儀② 振蕩器 ③手工水平搖動 ④混懸器,問題-3,下列描述正確嗎？ “TRUST法對早期、晚期梅毒檢測的敏感性低及治療后梅毒不敏感。例如一組272例抗-TP確認陽性樣本，而其只檢測到105例，敏感性為 38.2%” ” ，這樣的說法對嗎？,梅毒概述,梅毒概述

3、,梅毒是由梅毒螺旋體引起的一種慢性、系統(tǒng)性的全身性傳播疾病。人受感染后，螺旋體很快傳播全身，幾乎可以侵犯全身各個組織和器官，臨床表現(xiàn)多樣，且時顯時隱，病程較長。,梅毒概述,梅毒病人是唯一的傳染源。性接觸傳染占95%。主要通過性交由破損處傳染，梅毒螺旋體大量存在于皮膚粘膜損害表面，也見于唾液、乳汁、精液、尿液、陰道分泌物。梅毒孕婦可通過胎盤使胎兒在宮內(nèi)感染或出生時接觸母親有病損的產(chǎn)道受染。未經(jīng)治療的病人在感染一年內(nèi)最具傳染性，隨病期延長

4、，傳染性越來越小，病期超過4年者，通過性接觸無傳染性。,梅毒概述,臨床上分三期：Ⅰ期（初期）梅毒：感染后3周左右局部出現(xiàn)無痛性硬下疳。4-8周后，硬下疳自愈。Ⅱ期（中期）梅毒：發(fā)生于硬下疳出現(xiàn)后2-8周。Ⅲ期（晚期）梅毒：發(fā)生于感染后2年后，亦可長達10-15年。Ⅰ 、Ⅱ期傳染性強，但破壞性較小。 Ⅲ期螺旋體少但破壞性大，若侵害中樞神經(jīng)系統(tǒng)和心血管，可危及生命。,梅毒概述,螺旋體抵抗力極弱，對溫度和干燥特別敏感，離體后在干燥環(huán)境

5、中1-2小時即死亡，在50℃5分鐘死亡，在4 ℃置3天后可死亡，因此4℃血庫存放3天以上的血液無傳染梅毒的危險。對常用化學(xué)消毒劑亦敏感。,梅毒是一個可以治愈的傳染病,病史癥狀實驗室依據(jù) 實驗室檢查結(jié)果對梅毒診斷及判愈有決定性意義 ！,常用實驗室檢查方法,病原學(xué)方法血清學(xué)方法,病原學(xué)檢測,原理：一期、二期梅毒時，取硬下疳、扁平濕 疣、黏膜斑等皮損部位組織液或淋巴結(jié)穿刺術(shù)得 到的組織液，在暗視野顯微鏡下，光

6、線從聚光器 的邊緣斜射到涂片上的梅毒螺旋體而發(fā)出亮光， 從而可根據(jù)其特殊形態(tài)和運動方式進行檢測。 方法：（1）暗視顯微鏡檢查 （2）鍍銀染色法 （3）核酸檢測（血液標(biāo)本？） 注：梅毒螺旋體目前體外人工培養(yǎng)還沒有獲得成功， 僅能通過接種兔睪丸等部位進行有限增殖。,病原學(xué)檢查,病原學(xué)檢查的臨床意義 ： 螺旋體檢查是診斷早期梅毒的最佳方法，對于患者的早期診斷、及時治療、預(yù)后和 盡早切斷傳染源都有十分重 要的意義。 如未見到梅毒螺

7、旋體，并不能排除患梅毒的可能性。,血清學(xué)方法,(1) 非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗 （非特異性梅毒抗體） (2) 梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗 （特異性梅毒抗體）問題： 為什么梅毒診斷需要上述兩類血清學(xué)檢測方法？,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗原理,梅毒螺旋體一旦感染人體，宿主可對螺旋體表面的脂質(zhì)作 出免疫應(yīng)答，產(chǎn)生抗類脂抗原的抗體（非特異性抗體）。 未經(jīng)治療的病人，其血清內(nèi)的非特異性抗體可長期存在。 經(jīng)正規(guī)治療后，非特異性抗體可以逐漸減少

8、滴度至轉(zhuǎn)為陰 性。 問題： 臨床上非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗為什么需要做定性和定量兩種檢測方法？,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)原理,方法包括： （1）快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗 (RPR) （2）甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）（3）性病研究實驗室試驗 (VDRL)等。 基本成分是心磷脂 卵磷脂和膽固醇 抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物，凝集成網(wǎng)狀沉淀顆粒被肉 眼所見 上述方法的敏感性和特異性都基本相似,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗操作要

9、點,1、儀器：水平旋轉(zhuǎn)儀，調(diào)轉(zhuǎn)速（100轉(zhuǎn)/分），調(diào)轉(zhuǎn)幅（18mm）。 2、定性試驗 加樣：吸取0.05mL血清(漿)放在卡片圈中， 并均勻地涂布在整個圈內(nèi) 加抗原：將抗原輕輕搖勻，用9號針頭加1滴抗原 反應(yīng)：水平旋轉(zhuǎn)儀旋轉(zhuǎn)8分鐘(23 ℃ -29 ℃） ， 亮光下觀察結(jié)果 (60滴/mL，1滴=17ul ),非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗操作要點,3、定量試驗 血清稀釋度 :1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1

10、:64 1:128 1:256 1:512,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗臨床意義,早期梅毒（一期、二期）經(jīng)足量規(guī)則抗梅毒治療后 ： 一期梅毒1年后轉(zhuǎn)為陰性 。二期梅毒2年后轉(zhuǎn)為陰性。 晚期梅毒 治療后血清滴度下降緩慢，2年后約 50%病人血清反應(yīng)仍為陽性。,非梅毒螺旋體抗原血清試驗臨床意義,非梅毒螺旋體抗原血清試驗方法簡單、快 速、敏感性和特異性較好。適用于大量人 群的篩查。因治療后血清滴度可下降并陰性，故可作 為療效觀察、判

11、愈、復(fù)發(fā)或再感染的指征。VDRL試驗用于神經(jīng)梅毒腦脊液檢測特異性高，檢測陽性可以作為神經(jīng)梅毒確診依 據(jù)，但敏感性較低，即檢測陰性不能排除晚期神經(jīng)梅毒。,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗特點,假陽性反應(yīng) 技術(shù)性假陽性反應(yīng)一般是由于操作錯誤引起的 假陽性反應(yīng)，經(jīng)過重復(fù)試驗即可排除。 生物學(xué)假陽性反應(yīng)(一般滴度小于1:8），應(yīng)采用梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗如TPPA等進行排 除。,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗特點,由于感染梅毒后反應(yīng)素的出現(xiàn)晚于特

12、異性梅毒螺旋體抗體，晚期梅毒反應(yīng)素又可能轉(zhuǎn)陰，對隱性梅毒和神經(jīng)梅毒也不敏感。因此，做梅毒初篩時，存在一定數(shù)量的漏檢。,梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗原理,抗原為梅毒螺旋體特異蛋白（包括螺旋體重組特異抗原），檢測梅毒患者血中特異性抗梅毒螺旋體抗原的抗體。 感染梅毒螺旋體后，一旦梅毒螺旋體抗體試 驗呈陽性，則患者終身陽性。 問題：梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗的定量試驗在梅毒診療中有意義嗎？,梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗方法,梅毒螺旋體顆粒凝集試驗 (

13、TPPA) 梅毒螺旋體血球凝集試驗 (TPHA) 梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA） 梅毒免疫層析法-梅毒快速檢測 (RT) 熒光螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS） 梅毒螺旋體蛋白印跡試驗（WB）,TPPA,TPPA試驗用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒人血清中的抗梅毒螺旋體抗體結(jié)合，產(chǎn)生可見的凝集反應(yīng)，具有較高的敏感性和特異性。TPPA是目前WHO公認的梅毒抗原血清學(xué)試驗的“ 金標(biāo)準(zhǔn)”，常用于新方

14、法、新試劑的參照標(biāo)準(zhǔn)。,,TPPA試驗原理示意圖,明膠顆粒+ 梅毒抗原=抗原致敏顆粒 +血液中抗體 =抗原抗體凝集 + 明膠顆粒+梅毒抗原 =抗原致敏顆粒 +

15、 抗原致敏顆粒+血液中抗體 =抗原抗體凝集,,,,,,,,,,,,,TPPA試驗結(jié)果判讀敏感性,4+： 粒子光滑覆蓋整個孔底，有時邊緣有 折疊3+： 粒子光滑覆蓋大部分底 2+：粒子光滑聚集覆蓋孔底，周圍有一細胞環(huán) 病期 1+： 粒子光滑集聚覆概孔底，周圍有一明顯細胞環(huán) ±： 粒子沉集孔底，中央形成一小點 –： 粒子緊密沉積孔底中央,ELISA/ CLIA

16、,ELISA試驗是用重組梅毒螺旋體抗原包被固相 板條，加上梅毒血清和單克隆抗體酶標(biāo)記物，形成抗原抗體復(fù)合物與酶標(biāo)記物結(jié)合，用酶聯(lián) 檢測儀判定試驗陽性反應(yīng)。 本法可用于大樣本血清檢測。 化學(xué)發(fā)光法的臨床應(yīng)用意義基本同ELISA 化學(xué)發(fā)光法的敏感性？,梅毒免疫層析快速檢測方法,梅毒免疫層析快速檢測方法（血清、血漿法）,梅毒螺旋體抗原血清試驗臨床意義,作為非梅毒螺旋體抗原血清試驗(如RPR、TRUST等)初篩陽性標(biāo)本的確證試驗，排除R

17、PR、TRUS 假陽性。 不能區(qū)分既往感染和現(xiàn)癥感染，應(yīng)結(jié)合非梅毒螺旋體抗原血清試驗結(jié)果進行診斷。 TPPA等梅毒螺旋體抗原血清試驗不能作為療效觀察的指標(biāo)。,梅毒血清學(xué)試驗結(jié)果解釋,,問題：此結(jié)果解釋適用于先天（胎傳）梅毒嗎？,先天（胎傳）梅毒的實驗室診斷依據(jù),查到螺旋體 。其抗心磷脂抗體滴度持續(xù)上升，可用RPR半定量試驗每月檢測1次，連續(xù)6個月，檢測效價，效價增高或穩(wěn)定在高水平，表明是先天梅毒。如抗體來自母體IgG，通常在2-3

18、月內(nèi)消失。 其抗心磷脂抗體滴度高于其母親四倍（2個稀釋滴度）。 檢測抗梅毒的IgM特異性抗體陽性 。隨訪18個月觀察抗體的變化（哪一類抗體？）,梅毒IgM抗體（TP-IgM）,IgM抗體的產(chǎn)生是感染后的早期體液免疫應(yīng)答反 應(yīng)。IgM分子比IgG較大，所以IgM抗體不能通過胎盤 屏障。而母親的IgG抗體可以通過胎盤屏障傳給胎兒。 因此若在新生兒血中檢測到IgG抗體不能作為先天梅毒的診斷依據(jù)，而IgM抗體可為先天梅毒的診斷依據(jù)。

19、 IgM抗體檢測其特異性較高，但敏感性較低。因 此，IgM抗體檢測陰性，不能排除先天梅毒感染。,先天（胎傳）梅毒的實驗室診斷依據(jù),查到螺旋體 其抗心磷脂抗體滴度持續(xù)上升（TRUST,RPR） 其抗心磷脂抗體滴度高于其母親四倍（2個稀釋滴度） 檢測抗梅毒的IgM特異性抗體陽性 隨訪18個月觀察抗體的變化（特異性抗體）,規(guī)范化梅毒實驗室檢測基本要求,一、根據(jù)目的選擇檢測方法及檢測策略。二、人員 檢測技術(shù)人員需經(jīng)過上崗培

20、訓(xùn)。接受上崗培訓(xùn)內(nèi)容應(yīng)包括：梅毒檢測相關(guān)基礎(chǔ)知識、梅毒實驗室檢測技術(shù)基本實驗操作要求、結(jié)果解讀及臨床意義、質(zhì)量保證與生物安全等。 三、試劑 常規(guī)血清學(xué)檢測應(yīng)采用經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準(zhǔn)的 試劑。因不同廠家生產(chǎn)的同一種試劑的敏感性和特異性存在一定的 差異，建議選擇臨床質(zhì)量評估敏感性和特異性高的試劑。所有試劑須嚴格按要求妥善保存，并控制在有效期內(nèi)使用。,血清學(xué)檢測試劑的種類,非梅毒螺旋體抗原血清試驗 ：快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡

21、片試驗 (RPR ) 甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST） 性病研究實驗室試驗 (VDRL) 梅毒螺旋體抗原血清試驗 ：梅毒螺旋體顆粒凝集試驗 (TPPA) 梅毒螺旋體血球凝集試驗 (TPHA) 梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA） 梅毒免疫層析法-梅毒快速檢測 (RT) 熒光螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS）化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA） 梅毒IgM抗體檢測（IgM） 梅毒螺旋體蛋白印跡試驗（WB）,PCR技術(shù)應(yīng)

22、用于檢測梅毒螺旋體DNA,特異性強，敏感性高，是目前診斷梅毒螺旋體的先進方法。(1)標(biāo)本采集和處理：可采集局部分泌物、淋巴結(jié)液、羊求、血清、腦脊液等標(biāo)本，用煮沸或低速離心或堿裂解等方法從標(biāo)本中提取DNA模板。(2)診斷意義及評價 1)敏感性和特異性較高：尤其對無臨床表現(xiàn)、血清學(xué)為陰性的可疑梅毒、神經(jīng)性梅毒、胎傳梅毒等具有較好的輔助診斷價值。 2)不能區(qū)分活的和死的螺旋體，一般不用于梅毒治療后的復(fù)查。但死亡的梅毒螺旋體經(jīng)15～

23、30天即從機體內(nèi)清除，故治療數(shù)周后PCR陽性意昧著持續(xù)感染的可能。,問題1,下列哪些說法是錯的？ ① 一旦感染梅毒，TPPA常終身陽性 ②TPPA可用于療效判斷 ③梅毒孕婦所生嬰兒RPR和TPPA檢測結(jié)果陽性可診斷為胎傳梅毒 ④ RPR只能用于梅毒初篩,問題-1,下列哪些說法是錯的？⑤ ELISA法不能用于初篩 .⑥核酸檢測方法可以用于梅毒的血液標(biāo)本檢測⑦ 二期梅毒時，TPPA和RPR兩種血清學(xué)試驗敏感性均可達100％

24、,問題-2,開展RPR/TRUST試驗時應(yīng)采用下面哪種儀器或方法進行抗原抗體凝集反應(yīng)： ① 水平旋轉(zhuǎn)儀（√） ② 振蕩器 ③手工水平搖動 ④混懸器,問題-3,下列描述正確嗎？ “TRUST法對早期、晚期梅毒檢測的敏感性低及治療后梅毒不敏感，如本組272例抗-TP確認陽性樣本，而其只檢測到105例，敏感性為 38.2%” ”。,一期梅毒實驗室檢查,1.暗視野顯微鏡檢查：皮膚粘膜損害或淋巴結(jié)穿刺液可查見梅毒螺旋體

25、。2.非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)實驗： VDRL RPR TRUST 梅毒病灶出現(xiàn)1-2周時，血清中反應(yīng)素(抗體)陽性率為53%-83%，如感染不足2-3周，也可為陰性，應(yīng)于感染后4周復(fù)查。 3.梅毒螺旋體抗原血清學(xué)實驗： FTA-ABS:在第一期梅毒的頭幾天就可測出特異性抗體，尤其適用于與早期梅毒的診斷。 FTA-ABS-DS

26、 TPHA TPPA: TP- ELISA:此法可用于各期梅毒診斷,對感染血清靈敏度為95%. 極早期少數(shù)可為陰性。,二期梅毒實驗室檢查,暗視野顯微鏡檢查：二期皮損的尤其是扁濕平疣，濕丘疹及黏膜斑，可查見梅毒螺旋體。非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)實驗：陽性梅毒螺旋體抗原血清學(xué)實驗：陽性,三期梅毒（晚期）實驗室檢查,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)實驗：大多陽性，也可陰性。梅毒螺旋體抗原血清學(xué)實驗：陽性,前帶現(xiàn)象,非

27、梅毒螺旋體抗原血清學(xué)實驗（如RPR,TRUST）中，有時由于血清抗體水平太高，抗原抗體比例不合適，而出行弱陽性，不典型或陰性的結(jié)果，但臨床上又有典型的二期梅毒癥狀，將血清稀釋后再做血清學(xué)試驗，出現(xiàn)了陽性結(jié)果，稱為前帶現(xiàn)象。,引起梅毒免疫學(xué)檢測假陽性的因素,1.內(nèi)源性：RF因子，補體，高濃度的非特異性免疫球蛋白，異嗜性抗體，某些自身抗體，在ELISA測定中，可與其固相上包被的特異性抗體IgG以及隨后加入的酶標(biāo)抗體結(jié)合，出現(xiàn)假陽性。,引起梅

28、毒免疫學(xué)檢測假陽性的因素,2.外源性：標(biāo)本溶血，被細菌污染，儲存時間過長，標(biāo)本凝固不全等。（1）血紅蛋白中含有血紅素基團，有類似過氧化物的活性，在以HRP為標(biāo)志酶的ELISA測定中，若溶血，血紅蛋白很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后加入的HRP底物反應(yīng)顯色。（2）標(biāo)本被細菌污染，則一些細菌的內(nèi)源性酶本身會對相應(yīng)酶標(biāo)記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。,引起梅毒免疫學(xué)檢測假陽性的因素,（3）血液凝固不全，血清中仍然殘留部分纖維蛋白原，若

29、將其加入微孔中，在溫育過程中仍可形成肉眼可見的纖維蛋白快，易造成假陽性。,引起梅毒免疫學(xué)檢測假陽性的因素,3.在梅毒免疫學(xué)檢測試驗陽性的老年人中,有一些人確實是梅毒螺旋體的感染者,但有相當(dāng)一部分陽性者無梅毒的任何癥狀與體征,配偶梅毒血清學(xué)試驗均為陰性,除試驗陽性外,沒有診斷梅毒的任何依據(jù)。值得關(guān)注的是,非高危老年人群中的特異性梅毒血清學(xué)檢查出現(xiàn)假陽性的情況時有發(fā)生,且陽性率較正常人群高,年齡越大陽性率越高,常常是幾種試驗方法檢測的結(jié)果同

30、時陽性，特別是7O歲以上的老人陽性率明顯高于其他年齡段的人群。其陽性結(jié)果很難用正在或者曾經(jīng)梅毒感染過來解釋。假陽性反應(yīng)主要是肌體的生理狀態(tài)發(fā)生改變(如年齡變老)和某些疾病造成的,即使通過重復(fù)實驗也是無法避免。由此可見年齡與疾病因素是造成老年人梅毒抗體易發(fā)生假陽性的重要原因。,隱形梅毒,是指少數(shù)人感染了梅毒螺旋體后，在體內(nèi)可終身隱伏（血清反應(yīng)陽性，而無癥狀和病變），或在二、三期梅毒活動，局部病變消失而血清反應(yīng)陽性。,隱形梅毒,產(chǎn)生隱性梅毒

31、主要的原因是，梅毒未經(jīng)治療，或治療藥物劑量不足，治療不徹底，表現(xiàn)為病人無臨床癥狀，梅毒血清反應(yīng)陽性。還有另一種情況，病人曾有過某種方式的感染途徑，但由于病人抵抗力強，沒有出現(xiàn)過或僅出現(xiàn)過非常不顯著的臨床癥狀如宮頸硬下疳，以后一直沒有臨床表現(xiàn)，但梅毒血清為陽性，這都是隱性梅毒。隱性梅毒的發(fā)生主要取決于機體本身的免疫力、治療與梅毒螺旋體之間的較量的結(jié)果。當(dāng)機體免疫功能正常，或在治療其他疾病時曾不正規(guī)地使用過與治療梅毒有關(guān)的藥物，產(chǎn)生了一定

32、的治療效果時，體內(nèi)的梅毒螺旋體受到一定的限制；當(dāng)機體在某階段健康狀況不佳、免疫功能降低時，梅毒螺旋體可乘機在人體內(nèi)廣泛活動并損害各種組織。當(dāng)出現(xiàn)前一種情況時，即為潛伏梅毒，當(dāng)出現(xiàn)后一種情況時，就叫做顯發(fā)梅毒。,隱形梅毒,感冒藥讓梅毒轉(zhuǎn)隱性：隱性梅毒多發(fā)的罪魁禍?zhǔn)资菫E用抗生素。青霉素是最有效的殺梅毒螺旋體的藥物，其他抗生素也有一定效果。有人患了梅毒，自己買點藥吃，癥狀就好了；甚至有人恰好得了感冒，吃了感冒藥后梅毒的癥狀就看不出來了，但體內(nèi)