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文檔簡介
1、目的:
探索人臍帶Wharton膠支架負(fù)載脂肪干細(xì)胞構(gòu)建新型組織工程軟骨的可行性,并評價該組織工程軟骨修復(fù)兔膝關(guān)節(jié)全層軟骨缺損的效果。
方法:
?、艔耐妙i背部皮下脂肪分離得到脂肪干細(xì)胞,培養(yǎng)至P3代后通過流式細(xì)胞學(xué)鑒定其表面標(biāo)記物,明確其干細(xì)胞來源。⑵普通培養(yǎng)至P3代后更換為誘導(dǎo)液(DMEM中加入10%FBS,10ng/ml TGF-β1,25ng/ml bFGF,10-7M地塞米松)成軟骨方向誘導(dǎo)兩周,收集
2、細(xì)胞并調(diào)整終濃度為1×107/ml,將細(xì)胞接種至Wharton膠支架上繼續(xù)三維誘導(dǎo)一周構(gòu)建組織工程軟骨。FDA-PI染色及Hoechst33258染色評估細(xì)胞在支架上的活力及增殖情況,掃描電鏡觀察細(xì)胞在支架上分布及黏附情況,甲苯胺藍(lán)、番紅O、Ⅱ型膠原免疫組化染色觀察細(xì)胞外基質(zhì)分泌情況。⑶于兔膝關(guān)節(jié)軟骨滑車處形成1個直徑4mm,深2mm的環(huán)形全層軟骨缺損,設(shè)置空白組、單純支架材料組及細(xì)胞支架復(fù)合體組。術(shù)后24周取材,缺損修復(fù)區(qū)行大體觀察、
3、組織學(xué)染色、糖胺多糖、總膠原含量檢測及生物力學(xué)測定分析評價缺損修復(fù)情況。
結(jié)果:
?、帕魇郊?xì)胞學(xué)鑒定顯示CD73、CD90、CD105陽性,CD34、CD45、HLA-DR陰性,提示所取細(xì)胞為脂肪來源干細(xì)胞;⑵FDA-PI染色及Hoechst33258染色可見支架上粘附的細(xì)胞分布均勻,活細(xì)胞較多,死細(xì)胞較少,支架深層也有部分細(xì)胞粘附。掃描電鏡觀察可見誘導(dǎo)后大量細(xì)胞黏附于支架孔隙內(nèi),呈圓形或橢圓形。組織學(xué)染色陽性提示誘導(dǎo)
4、后細(xì)胞分泌大量細(xì)胞外基質(zhì);⑶術(shù)后24周細(xì)胞支架復(fù)合體組缺損區(qū)大部分被修復(fù),缺損部位被軟骨組織填充,修復(fù)區(qū)表面光滑。組織學(xué)染色顯示有典型的透明軟骨樣結(jié)構(gòu),GAG、總膠原定量測定提示可達(dá)正常值的90%以上,生物力學(xué)測定提示與正常軟骨相似。單純支架材料組雖然缺損區(qū)大部分被修復(fù),但修復(fù)區(qū)多為纖維軟骨,僅有少量透明軟骨樣結(jié)構(gòu)??瞻捉M未能修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨缺損,纖維組織部分填充缺損,表面覆蓋薄層纖維組織。
結(jié)論:
脂肪干細(xì)胞作為軟骨組
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