流式細(xì)胞儀和細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色

1、流式細(xì)胞儀和細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色流式細(xì)胞儀和細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色無紅細(xì)胞的單細(xì)胞懸浮液制備的脾細(xì)胞，刀豆蛋白A爆炸或PBL在FACS緩沖液（PBS中，用1％牛血清白蛋白和0.05％NaN的3）和細(xì)胞進(jìn)行染色，在黑暗中在冰上20分鐘，進(jìn)行表面的表達(dá)CD8α（APCCY7），CD4（PerCPCY5.5），CD3ε（FITC），CD137（FITC），CD19（PerCPCy5.5標(biāo)記），或NK1.1（PECY7所有的抗體，BD生物科學(xué)，圣地亞

2、哥，CA）。細(xì)胞內(nèi)染色，細(xì)胞透性使用的CytofixCytoperm試劑盒試劑盒，根據(jù)生產(chǎn)商的方案，和細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子使用腫瘤壞死因子α，腫瘤壞死因子α或IFNγ（PR700，BD生物科學(xué)）。四聚體分析，進(jìn)行溫育的細(xì)胞懸浮液與H2KbTRP2的180188四聚體（SVYDFFVWL，APC標(biāo)記，Sanquin，）或H2KbOVA257264四聚體，實(shí)物禮品CM25分鐘，在37C和5％CO2之前，隨后的表面抗體染色。表面MHCI類檢測(cè)是由孵

3、化IFNγ引物和未曝光B16.F10細(xì)胞與小鼠抗鼠MHCI類抗體，圣迭戈，隨后孵育檢測(cè)的山羊抗小鼠IgG2a抗體，測(cè)量樣品在FACS廣東II流式細(xì)胞儀（BecktonDickinson公司，圣迭戈，CA）。使用FlowJo軟件的數(shù)據(jù)進(jìn)行了分析。流式細(xì)胞儀和細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色流式細(xì)胞儀和細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色無紅細(xì)胞的單細(xì)胞懸浮液制備的脾細(xì)胞，刀豆蛋白A爆炸或PBL在FACS緩沖液（PBS中，用1％牛血清白蛋白和0.05％NaN的3）和細(xì)胞進(jìn)

4、行染色，在黑暗中在冰上20分鐘，進(jìn)行表面的表達(dá)CD8α（APCCY7），CD4（PerCPCY5.5），CD3ε（FITC），CD137（FITC），CD19（PerCPCy5.5標(biāo)記），或NK1.1（PECY7所有的抗體，BD生物科學(xué)，圣地亞哥，CA）。細(xì)胞內(nèi)染色，細(xì)胞透性使用的CytofixCytoperm試劑盒試劑盒，根據(jù)生產(chǎn)商的方案，和細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子使用腫瘤壞死因子α，腫瘤壞死因子α或IFNγ（PR700，BD生物科學(xué)）。四聚體

5、分析，進(jìn)行溫育的細(xì)胞懸浮液與H2KbTRP2的180188四聚體（SVYDFFVWL，APC標(biāo)記，Sanquin，）或H2KbOVA257264四聚體，實(shí)物禮品CM25分鐘，在37C和5％CO2之前，隨后的表面抗體染色。表面MHCI類檢測(cè)是由孵化IFNγ引物和未曝光B16.F10細(xì)胞與小鼠抗鼠MHCI類抗體，圣迭戈，隨后孵育檢測(cè)的山羊抗小鼠IgG2a抗體，測(cè)量樣品在FACS廣東II流式細(xì)胞儀（BecktonDickinson公司，圣迭戈