革蘭氏陽(yáng)性無(wú)芽胞桿菌

1、第二十一章 革蘭氏陽(yáng)性無(wú)芽胞桿菌第二十二章 G+形成芽孢的細(xì)菌李氏桿菌和豬丹毒絲桿菌所引起的疾病是臨床上常見(jiàn)多發(fā)病。前者的代表種為產(chǎn)單核細(xì)胞李氏桿菌是一種胞內(nèi)寄生菌，產(chǎn)生溶血素，可用增菌法鑒出。后者是常見(jiàn)的豬病的重要病原性細(xì)菌，自然界中分布十分廣泛，明膠穿刺培養(yǎng)成試管刷狀。炭疽桿菌是炭疽的病原，該病有重要的公共衛(wèi)生意義。該菌在形態(tài)上有雙重性，以其莢膜和毒素致病，該菌的微生物學(xué)診斷十分重要。致病性梭菌很多，它們?cè)谛螒B(tài)、培

2、養(yǎng)特點(diǎn)、所致疾病方面各有特點(diǎn)，但多以毒力強(qiáng)大的外毒素致病，其中以氣腫疽梭菌、腐敗梭菌、諾維氏梭菌較為重要。,章節(jié)題目：第21章 革藍(lán)氏陽(yáng)性無(wú)芽孢桿菌 第22章 革藍(lán)氏陽(yáng)性產(chǎn)芽孢桿菌 目的要求：掌握壞死桿菌、李氏桿菌、豬丹毒絲桿菌和炭疽桿菌的重要特性；重要病原性梭菌的異同點(diǎn) 了解腎桿菌的主要特性 本節(jié)重點(diǎn)：壞死桿菌、李氏桿菌、豬丹毒絲桿菌和炭疽桿菌的重要特性本節(jié)難點(diǎn)：無(wú),第十二章 革蘭氏陽(yáng)性無(wú)芽胞桿菌有3個(gè)屬：李

3、氏桿菌屬丹毒絲菌屬腎桿菌屬,第一節(jié) 李氏桿菌屬本屬細(xì)菌為G+桿菌需氧或兼性厭氧無(wú)芽胞無(wú)莢膜20~25℃下能運(yùn)動(dòng)37℃不運(yùn)動(dòng),有7個(gè)種：產(chǎn)單核細(xì)胞李氏桿菌伊氏李氏桿菌韋氏李氏桿菌塞氏李氏桿菌格氏李氏桿菌：不致病莫氏李氏桿菌：不致病,產(chǎn)單核細(xì)胞李氏桿菌 一、所致疾?。杭?xì)胞內(nèi)寄生菌，牛羊易感，小牛、羔羊表現(xiàn)為敗血癥或肝臟壞死 ，成年牛間表現(xiàn)為神經(jīng)癥狀的“轉(zhuǎn)圈病”，母畜可致流產(chǎn)。孕婦可致流產(chǎn)，兒童出現(xiàn)神經(jīng)癥狀

4、，獸醫(yī)易患皮膚型李氏桿菌病。,產(chǎn)單核細(xì)胞李氏桿菌 二、形態(tài)及染色特點(diǎn)：G+規(guī)則的短桿菌，呈“發(fā)渣”狀，兩端鈍圓，有時(shí)排列成V型，20-25℃下培養(yǎng)產(chǎn)生4根周身鞭毛，37℃下一根鞭毛，無(wú)芽孢，無(wú)莢膜。,三、培養(yǎng)及生化特性普通培養(yǎng)基上可生長(zhǎng)，但加入血液或血清生長(zhǎng)更佳，4℃下可緩慢增殖（特點(diǎn)）。1．血清瓊脂：圓形，光滑透明，淡藍(lán)色小菌落。2．血平板：β型狹窄溶血環(huán)。棒狀桿菌和丹毒桿菌為α溶血。,三、培養(yǎng)及生化特性3．肉湯：均勻渾濁

5、，時(shí)間久可形成粘稠 沉淀，無(wú)菌環(huán)，無(wú)菌膜。4．明膠穿刺：沿穿刺線生長(zhǎng)，呈倒立樹(shù) 木狀，不液化明膠。5．生化特點(diǎn)：發(fā)酵糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，其他具體看書(shū)。,四、微生物學(xué)診斷1．分離培養(yǎng)及鑒定①取患畜血液，腦組織研磨液，加入50ml胰蛋白胨肉湯中→37℃24h→劃線含有5%綿羊血的胰蛋白胨瓊脂→是否有β溶血及淡藍(lán)色小菌落。,四、微生物學(xué)診斷1．分離培養(yǎng)及鑒定②挑取特征性菌落作純培養(yǎng)后，用純培養(yǎng)物作以下試驗(yàn)：染色：G+短桿菌。溶血性檢查

6、：β溶血，20－25℃運(yùn)動(dòng)。生化試驗(yàn)：略③動(dòng)物致病試驗(yàn)：肉湯培養(yǎng)物鴿子胸肌注射1ml，豚鼠皮下1ml，2-5d內(nèi)鴿子死亡，豚鼠死亡。,2．血清學(xué)檢查：凝集反應(yīng)。病羊，牛，豬血清凝集價(jià)達(dá)1∶250~1∶500。馬：1∶1000－1∶2500流產(chǎn)牛：1∶800－1∶1600五、免疫防治1．滅活強(qiáng)毒菌株免疫小鼠產(chǎn)生數(shù)月堅(jiān)強(qiáng)免疫力。2．免疫能通過(guò)淋巴細(xì)胞被動(dòng)轉(zhuǎn)移，但不能通過(guò)血清 被動(dòng)轉(zhuǎn)移。,第二節(jié) 丹毒絲菌屬只有1個(gè)

7、種，即：豬丹毒絲菌（豬丹毒桿菌）一、所致疾病1．引起3－12月齡豬丹毒，3－4周歲羔羊慢性多發(fā)性關(guān)節(jié)炎，雞，火雞衰弱和下痢、鴨的敗血癥并侵害輸卵管。,第二節(jié) 丹毒絲菌屬一、所致疾病2．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物以小鼠和鴿子最易感，家兔和豚鼠抵抗力強(qiáng)。3．人感染后發(fā)生皮膚病變稱“類丹毒”，病狀與人的丹毒病相似，人的丹毒病由化膿性鏈球菌屬致。,豬丹毒病理,一、發(fā)病機(jī)理,二、病理變化（如圖）,（一）、急性敗血型,（二）、亞急性疹塊型,（三）、慢性

8、型,1、豬丹毒心內(nèi)膜炎,2、慢性豬丹毒關(guān)節(jié)炎,3、皮膚壞死,二、形態(tài)及染色特征G+直或稍彎曲的細(xì)桿菌,單在或V形排列在慢性病豬的心內(nèi)膜中呈長(zhǎng)絲狀，無(wú)莢膜，無(wú)芽胞，無(wú)鞭毛。,三、培養(yǎng)特性微需O2或兼性厭氧，普通培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)。1．血平板：濕潤(rùn)，光滑透明，灰白色露珠樣的圓形小菌落，α溶血（李氏桿菌狹窄的β溶血）。,三、培養(yǎng)特性2．血清肉湯：輕度混濁，有少量白色粘稠沉淀，無(wú)菌環(huán)，無(wú)菌膜。3．明膠穿刺：沿穿刺線橫向四周生長(zhǎng)，如試管刷

9、狀，不液化明膠。4．麥康凱平板：不生長(zhǎng)。,四、微生物診斷1．取材：高熱期病豬靜脈采血，死后取心臟，肝、脾，腎，骨髓，淋巴結(jié)，涂片染色鏡檢，G+細(xì)桿菌，可初步診斷。2．分離培養(yǎng)血平板：露珠狀小菌落，α溶血麥康凱：不生長(zhǎng),3．動(dòng)物致病性試驗(yàn)病料制成鹽水乳劑，小鼠皮下0.2ml，鴿子胸肌1ml，豚鼠皮下1ml。結(jié)果：小鼠，鴿子，2-5d，死亡，尸體剖檢可分離大量丹毒菌。豚鼠不反應(yīng)。,4．血清學(xué)診斷：凝集反應(yīng)。（1）玻片法：取標(biāo)

10、準(zhǔn)抗原2滴，1個(gè)加病豬血清，另一個(gè)加生理鹽水，2min內(nèi)凝集為+。（2）試管法：將血清作1∶50和1∶100釋稀2管，每管1ml，加標(biāo)準(zhǔn)抗原1~2滴。37℃放2-4 h，如1∶50凝集，為陽(yáng)性。免疫熒光試驗(yàn)，環(huán)狀沉淀試驗(yàn)。,五、免疫治療1．本菌有良好免疫原性，應(yīng)用豬丹毒活菌苗GC42。2．滅活疫苗：三聯(lián)苗（豬瘟，豬丹毒，豬肺疫）。3．抗豬丹毒血清預(yù)防及治療。4．青霉素治療。,第三節(jié) 腎桿菌屬鮭腎桿菌：致鮭魚(yú)、鱒魚(yú)的細(xì)菌

11、性腎病，外觀無(wú)明顯變化，剖檢可見(jiàn)腎臟的乳白色顆粒肉芽腫病灶。,,,,,,,,本次小節(jié),李氏桿菌和豬丹毒絲桿菌所引起的疾病是臨床上常見(jiàn)多發(fā)病前者的代表種為產(chǎn)單核細(xì)胞李氏桿菌,是一種胞內(nèi)寄生菌，產(chǎn)生溶血素，可用增菌法鑒出后者是常見(jiàn)的豬病的重要病原性細(xì)菌，自然界中分布十分廣泛，明膠穿刺培養(yǎng)成試管刷狀,第十三章 G+形成芽孢的細(xì)菌產(chǎn)芽孢的細(xì)菌包括6個(gè)屬： 芽孢桿菌屬：引起動(dòng)物疾病 梭菌屬：引起動(dòng)物疾病

12、芽孢乳桿菌屬 脫硫腸狀菌屬 芽孢八疊球菌屬 顫螺菌屬,,第一節(jié) 芽孢桿菌屬 本屬種類繁多有34個(gè)正式種和24個(gè)不正式種，對(duì)人畜致病的主要是： 炭疽芽孢桿菌：致炭疽 蠟狀芽孢桿菌：引起食物中毒,一、炭疽芽孢桿菌（一）致病性：能引起人和動(dòng)物的炭疽病1、牛、綿羊，鹿等最易感：急性敗血癥。2、豬、馬、駱駝、山羊次之：豬表現(xiàn)為慢性咽部局限感染。3、狗、貓食肉獸有相當(dāng)?shù)挚沽Γ罕憩F(xiàn)為腸炭疽。

13、4、禽類不感染。5、人由于接觸病畜尸體或污染畜產(chǎn)品：引起腸炭疽，肺炭疽，皮膚炭疽。6、死亡家畜通常表現(xiàn)為尸僵不全，血液凝固不良，呈煤焦油狀，天然孔出血。,炭疽病理,一、發(fā)病機(jī)理,二、病理變化,（一）、敗血型炭疽（如圖）,（二）、癰型炭疽,1、咽炭疽,（1）、急性咽炭疽,（2）、慢性咽炭疽,2、皮膚炭疽癰,3、腸炭疽癰,4、肺炭疽癰,（二）形態(tài)及染色特征 G+大桿菌，無(wú)鞭毛，不運(yùn)動(dòng)，芽胞位于菌體中央，直徑不大于菌體，可形成莢膜。

14、 在動(dòng)物組織或血液中，單在或2—5個(gè)菌連接成短鏈，菌體矢直，菌端平截而呈“竹節(jié)狀”，圍繞以豐厚的莢膜，莢膜抗腐敗能力強(qiáng)，菌體因腐敗而消失后，莢膜仍可殘留稱為“菌影”。 組織中的菌體只有遇到游離氧時(shí)，才形成芽孢。所以懷疑為炭疽病時(shí)，嚴(yán)禁剖檢，避免與O2接觸，耳尖采血涂片。 在培養(yǎng)基中，形成長(zhǎng)鏈，在普通培養(yǎng)基上不形成莢膜，并于培養(yǎng)18－24h開(kāi)始形成芽孢。,,,,,,,,,體內(nèi)炭疽桿菌,體外炭疽桿菌,（三）培養(yǎng)特性需氧兼性厭氧

15、，營(yíng)養(yǎng)要求不高。1．普通培養(yǎng)基上：強(qiáng)毒株形成灰白色不透明，大而扁平，表面干燥，邊緣呈卷發(fā)狀的粗糙菌落（R）；弱毒株形成小而隆起，光滑濕潤(rùn)，邊緣整齊的S型菌落。2．血平板：不溶血（類炭疽呈β溶血）3．普通肉湯：上部清朗，底部有絮狀沉淀，無(wú)菌環(huán)和菌膜，輕搖試管，沉淀物徐徐上升，纏繞成團(tuán)而不散開(kāi)。,,,,,,,,,培養(yǎng)特點(diǎn),（三）培養(yǎng)特性4．明膠穿刺：沿穿刺線緩慢液化，形成倒立的松樹(shù)狀。5．青霉素串珠試驗(yàn)：在含有0.5單位/ml

16、的青霉素培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)，由于細(xì)胞壁中粘肽合成受到抑制，因而形成原生質(zhì)體相互連接成串稱為“串珠反應(yīng)”，這是該菌特有的反應(yīng)。,（四）生化特性糖發(fā)酵：G+ 蔗+ 麥+ 菊+ 蕈糖+ 果糖+ 甘油+ 伯膠糖－ 木－甘露醇－淀粉+ 硝酸鹽還原+ 吲哚－ H2S－ H2O2+ （五）抵抗力1．繁殖體的抵抗力不強(qiáng)：60℃ 30－60min殺死75℃ 5－15min殺死。一般消毒

17、劑短時(shí)間內(nèi)可將其殺死，未剖檢的尸體，細(xì)菌隨腐敗而迅速死亡。2．芽胞抵抗力特強(qiáng)：干燥狀態(tài)下存活10年，土壤中20－30年。,（六）抗原性：有4種主要抗原成分1．莢膜多肽抗原：與毒力有關(guān)，是一種半抗原，此抗原的抗體無(wú)保護(hù)作用，但有特異性較強(qiáng)，可用該抗體進(jìn)行莢膜腫脹試驗(yàn)及熒光抗體法進(jìn)行鑒定細(xì)菌。,（六）抗原性：有4種主要抗原成分2．菌體多糖抗原：當(dāng)毒力無(wú)關(guān)，但性質(zhì)穩(wěn)定，耐高溫高壓，抗原性不被破壞?？捎脕?lái)制備炭疽熱沉淀反應(yīng)用抗原，即A

18、scoli氏反應(yīng)。此法特異性不高，與其它芽孢菌能發(fā)生交叉反應(yīng)。3．保護(hù)性蛋白抗原（PA）：是毒素組成成分，具有免疫原性，能使機(jī)體產(chǎn)生抗體保護(hù)被感染。4.芽孢抗原,（七）毒素和毒力1．莢膜：抗吞噬和消除抗體作用，利于細(xì)菌擴(kuò)散。2．炭疽毒素：包括水腫毒素和致死性毒素2種，由3個(gè)亞單位組成： 水腫因子（EF）（脂蛋白） 致死因子（LF）（蛋白質(zhì)） 保護(hù)性抗原（PA）（蛋白質(zhì)

19、）三者單獨(dú)均無(wú)毒性作用，只有PA-EF或PA-LF結(jié)合才有致病作用。作用機(jī)理：毒素作用于微血管內(nèi)皮C，使之通透性增強(qiáng)，損害腎臟，干擾糖代謝，引起彌散性血管內(nèi)凝血，導(dǎo)致動(dòng)物死亡。,（八）微生物學(xué)診斷嚴(yán)禁剖檢，自耳根部采血，必要時(shí)切開(kāi)肋間取脾臟，皮膚炭疽取滲出液。1．細(xì)菌學(xué)檢查①取材、涂片、染色、鏡檢：發(fā)現(xiàn)有莢膜的竹節(jié)狀大桿菌（初步診斷）。②分離培養(yǎng)：a. 普通平板。 b. 血平板。

20、 c. 選擇性培養(yǎng)基：如戊烷脒瓊脂、 溶菌酶－正鐵 血紅素瓊脂、Knisely培養(yǎng)基，37℃ 16－20h挑選可疑菌落與其它大桿菌作鑒別診斷。,③生化試驗(yàn)④致病性試驗(yàn)：被檢病料制成1∶5懸液，小白鼠0.1ml皮下注射，兔、豚鼠0.2-0.3ml，動(dòng)物死于敗血癥，剖檢取臟器涂片鏡檢可見(jiàn)G+有莢膜大桿菌，確診。,2．血清學(xué)試驗(yàn)：用已知抗體，檢測(cè)炭疽抗原。①Ascoli氏沉淀反應(yīng)：1902年創(chuàng)立，用

21、加熱抽提炭疽桿菌多糖抗原與已知抗體進(jìn)行沉淀反應(yīng)，適用于各種病料、皮張、腐敗尸體。缺點(diǎn)是特異性不高，敏感性差。②間接血凝試驗(yàn)：抗血清吸附于炭粉或乳膠上，進(jìn)行玻片凝集試驗(yàn)。③青霉素串珠試驗(yàn)。④熒光抗體試驗(yàn)。⑤瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)：檢查是否有PA產(chǎn)生。,（九）防治1．Ⅱ號(hào)炭疽芽胞苗：巴斯德將強(qiáng)毒株 42.5 ℃培養(yǎng)10-12天，使其喪失形成芽孢的能力，然后35℃ 培育4-7天，使其恢復(fù)形成芽孢的能力，用這種細(xì)菌制成疫苗叫Ⅱ號(hào)炭疽芽胞苗。

22、2．無(wú)毒炭疽芽孢苗：南非畜牧獸醫(yī)研究所選育的一株弱毒變種，失去形成莢膜能力，比Ⅱ號(hào)炭疽芽孢易余毒力強(qiáng)。此疫苗對(duì)山羊有強(qiáng)烈反應(yīng),可引起嚴(yán)重反應(yīng)，甚至死亡。3．抗炭疽血清以下圖片為鼠疫相關(guān),鼠疫的壞死及出血,二、蠟樣芽孢桿菌廣泛存在在于自然界，如土壤、水、空氣、飼料、食品，一定條件下，對(duì)人致病：引起人胃腸道感染（食物中毒）、眼球炎、新生兒上呼吸道感染和臍帶炎。自然情況下，引起牛的乳腺炎，驢的皮下水腫，犬，貓腹瀉。,蠟樣芽孢桿菌,

23、第二節(jié) 梭菌屬一、屬的特性 厭氧芽孢桿菌，芽孢呈卵圓形或圓形，直徑大于菌體，使菌體膨大呈梭形，故得名。大多數(shù)有鞭毛（魏氏梭菌除外），無(wú)莢膜（魏氏梭菌除外），G+。二、分類及所致疾病本屬有80個(gè)種，多為非致病菌，常見(jiàn)致病菌約為11種。,三、疾病類型及診斷原則疾病類型有5大類。1．氣腫疽與惡性水腫：急性敗血癥且有氣性水腫癥狀。 氣腫疽：氣腫疽梭菌引起，經(jīng)消化道感染。 惡性水腫：病原復(fù)雜，動(dòng)物（腐敗梭菌）、人

24、 （A型產(chǎn)氣莢膜梭菌）。診斷原則：病原菌的檢查。,2．羊快疫、羊猝狙、腸毒血癥、黑疫、細(xì)菌性血紅素尿：均為毒血癥。 （1）羊猝狙：C型魏梭菌引起。（2）腸毒血癥：B型魏氏梭菌引起。 這兩個(gè)病，細(xì)菌不一定侵入體內(nèi)，而在腸道中產(chǎn)生毒素，故微生物診斷主要靠腸內(nèi)容毒素檢查（查毒素）,2．羊快疫、羊猝狙、腸毒血癥、黑疫、細(xì)菌性血紅素尿：均為毒血癥。 （3）羊快疫：腐敗梭菌經(jīng)消化道感染，進(jìn)入血液造成敗血癥，主要檢查病原。（4）

25、黑疫：B型諾維氏梭菌（5）細(xì)菌性血紅素尿：溶血梭菌此二菌存在于肝臟，當(dāng)肝受損時(shí)，乘機(jī)繁殖，產(chǎn)生毒素致病，主要查病原，次要查毒素。,3．羔羊痢疾，犢牛痢疾，人禽的壞死性腸炎由魏氏梭菌在腸道內(nèi)產(chǎn)生毒素所致，細(xì)菌不一定侵入體內(nèi)，主要查毒素。4．人畜的肉毒中毒、人魏氏梭菌食物中毒：均由病原菌在食物或飼料中生長(zhǎng)繁殖，產(chǎn)生毒素被食入而中毒。肉毒癥：主要檢查肉毒毒素，其次細(xì)菌學(xué)檢查。魏氏梭菌食物中毒：可疑食物分離細(xì)菌，并測(cè)定其

26、 毒素產(chǎn)生能力。5．破傷風(fēng)：破傷風(fēng)梭菌經(jīng)傷口感染，產(chǎn)生破傷風(fēng)毒素引起，癥狀極為特征“木馬狀”，不需微生物診斷。,四、梭菌屬分離鑒定應(yīng)注意事項(xiàng)1．專性厭氧，必須采用厭氧培養(yǎng)物。焦性沒(méi)食子酸法、共棲法，肝塊肉湯、鐵釘牛乳。2．培養(yǎng)基必須是新鮮配制，厭氧條件下保存。3．梭菌在培養(yǎng)基表面蔓延生長(zhǎng)，不易得到單個(gè)菌落，為了得到單個(gè)菌落，可將瓊脂量加到4~6%（一般2%），或劃線接種后在表面再加注一層瓊脂培養(yǎng)基，以限制

27、其蔓延生長(zhǎng)。,四、梭菌屬分離鑒定應(yīng)注意事項(xiàng)4．污染嚴(yán)重時(shí)，80℃ 20min殺死雜菌，25℃下培養(yǎng)。5．腐敗梭菌，魏氏梭菌容易在死后侵入動(dòng)物體，而諾維梭菌、溶血梭菌存在正常動(dòng)物體內(nèi)，故從動(dòng)物體分離出這些梭菌，并不能肯定它們就是病原，應(yīng)進(jìn)行毒力測(cè)定。,五、產(chǎn)氣莢膜梭菌舊名：魏氏梭菌，自然界分布廣，可見(jiàn)于污水，土壤，飼料，食物及人畜腸道中，一定條件下，引起多種嚴(yán)重疾病。（一）形態(tài)染色特征 G+粗大正直桿菌，單在或成雙排列，無(wú)鞭毛

28、，一般條件下培養(yǎng)芽孢很少產(chǎn)生，有莢膜。,產(chǎn)氣莢膜梭菌（二）培養(yǎng)特性厭氧要求不高，普通培養(yǎng)基上易生長(zhǎng)。1．葡萄糖血平板：圓形，光滑，隆起，淡灰白色中等大小菌落，有的可形成圓盤形邊緣呈鋸齒狀，表面有輻射狀條紋的“勛章”樣大菌落，產(chǎn)生“雙重溶血環(huán)”內(nèi)環(huán)β溶血，外環(huán)為α溶血。2．肝塊肉湯：5-6h，均勻渾濁，產(chǎn)生大量氣體。,（三）生化特性1．牛乳暴烈發(fā)酵：魏氏梭菌接種牛乳培養(yǎng)基8-10h后，發(fā)酵牛乳中的乳糖使牛乳酸凝，同時(shí)產(chǎn)生大量氣體

29、使凝塊變多孔的海綿狀，嚴(yán)重時(shí)，被沖成數(shù)段，甚至噴出管外。2．明膠液化，糖發(fā)酵⊕ H2S+ 吲哚－ HNO3－,（四）型別及病原性據(jù)毒素將該菌分為5個(gè)型：A，B，C，D，EA型產(chǎn)氣莢膜梭菌：引起人畜氣性壞疽，食物中毒，牛、羔羊、仔豬、兔、腸毒血癥。B～：羔羊痢疾，其它動(dòng)物腸毒血癥。C～：綿羊猝狙，還有腸毒血癥及壞死性腸炎。D～：羔羊，綿羊，牛腸毒血癥。E～：犢牛，羔羊腸毒血癥，但很少發(fā)生,（五）微生物學(xué)診斷細(xì)

30、菌學(xué)診斷意義不大，因?yàn)槲菏纤缶侨诵竽c道中常見(jiàn)菌，或者死后被侵入，從病料中檢出該菌并不能說(shuō)明它就是病原。必須進(jìn)行腸內(nèi)容物毒素檢查。1．方法：回腸內(nèi)容物→加適量滅菌生理鹽水作1-3倍稀釋→離心取上清，濾過(guò)除菌→濾液靜脈注射家兔（1-3ml），小鼠（0.1-0.3ml）→數(shù)分鐘至10小時(shí)內(nèi)死亡，證明有毒素存在。2．為了進(jìn)一步證明是否為魏氏梭菌毒素及毒素型，必須進(jìn)行毒素中和試驗(yàn)。方法：上述濾液3份。,I+C型魏氏梭菌抗毒素血清

31、 Ⅱ+D型魏氏梭菌抗毒素血清 37℃作用40min→靜脈注射小鼠或兔子 Ⅲ+生理鹽水觀察12h, 記錄結(jié)果如下：D型抗毒素血清可保護(hù) C型抗毒素血清也可保護(hù)————A型毒素 C型抗毒素血清不能保護(hù)————D型毒素D型抗毒素血清不保護(hù) C型抗毒素血清可保護(hù)—

32、———B型或C型毒素 C型也不保護(hù)————可能是E型或不是魏氏梭菌毒 素，再用E型血清試驗(yàn)確定,,E型能保護(hù)——E型毒素。 E型不能保護(hù)——不是魏氏梭菌毒素。 不能區(qū)分B型或C型毒

33、素時(shí)，濾液中加入0.25~0.5%胰酶，37℃作用30-60min，離心沉淀取上清再與C型抗血清進(jìn)行中和保護(hù)試驗(yàn)。C型抗毒素血清不能保護(hù)————B型毒素C型抗毒素血清能保護(hù)————C型毒素（原因B型毒素中的ε毒素尚為不顯毒性的原生毒素時(shí)，可被C型血清中和； ε原生毒素被細(xì)菌產(chǎn)生的蛋白酶激活，顯示出毒力，C型血清就不能中和它了）。 （六）免疫防治羊快疫，羊猝狙，腸毒血癥，三聯(lián)苗防治,,六、肉毒梭菌一種腐生性細(xì)菌，分部廣泛，

34、不能在活的機(jī)體內(nèi)生長(zhǎng)繁殖。在一定條件下，生長(zhǎng)繁殖產(chǎn)生肉毒毒素，人畜食入毒素污染的食物飼料引起中毒。肉毒毒素是迄今已知化學(xué)毒素及細(xì)菌毒素中毒性最強(qiáng)的一種，比KCN強(qiáng)10000倍，1g殺死20億只老鼠， 100萬(wàn)個(gè)人。七、氣腫疽梭菌又名費(fèi)氏梭菌，俗稱黑腿病桿菌，引起氣腫疽。主要發(fā)生于牛，癥狀主要是肌肉豐滿部位發(fā)生氣性水腫，受害肌肉呈暗紅色，故又稱為黑腿病。八、腐敗梭菌引起人和動(dòng)物的惡性水腫，還引起羊快疫。,九、諾維梭菌按照其毒素

35、差異，可分4個(gè)菌型：A型：引起人和動(dòng)物惡性水腫，又稱水腫梭菌，公羊因斗毆引起頭部感染而發(fā)生“大頭病”。B型：引起綿羊的黑疫，患病動(dòng)物皮下靜脈顯著充血，使皮膚呈暗黑色外觀。C型：引起水牛骨髓炎，表現(xiàn)為骨髓的漸進(jìn)性壞死與化膿 （僅發(fā)病于印尼）。D型：引起牛的細(xì)菌性血紅尿，（我國(guó)尚無(wú)報(bào)道）。,十、破傷風(fēng)梭菌引起人畜的破傷風(fēng)，以骨骼肌發(fā)生強(qiáng)直性痙攣的癥狀為特征。必須有傷口才感染。,破傷風(fēng)梭菌，革蘭染色 破傷風(fēng)梭菌是