抗菌藥敏試驗(yàn)的意義

1、藥敏試驗(yàn)的意義：1.查出耐藥，減少治療錯(cuò)誤，便于醫(yī)生選擇個(gè)體化療方案、節(jié)省費(fèi)用。2.進(jìn)行耐藥監(jiān)測(cè)，為醫(yī)院感染控制部門(mén)提供防治依據(jù)，為經(jīng)驗(yàn)用藥提供可靠依據(jù)。3.利用耐藥監(jiān)測(cè)結(jié)果控制抗菌藥物應(yīng)用，減少耐藥菌株的出現(xiàn)，延長(zhǎng)新藥使用壽命。4.為新藥的研究和評(píng)估提供有價(jià)值的信息。（二）、藥物敏感試驗(yàn)規(guī)則目前世界上通用的規(guī)則是德國(guó)和歐洲標(biāo)準(zhǔn)，而我國(guó)主要以臨床試驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（CLSI），即美國(guó)國(guó)家實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(NCCLS)的規(guī)則為標(biāo)準(zhǔn)，這個(gè)標(biāo)

2、準(zhǔn)主要包括CLSI紙片擴(kuò)散法（M2）和需氧菌稀釋法（M7）。（三）、抗菌藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果參照標(biāo)準(zhǔn)1.標(biāo)準(zhǔn)的正確使用M100–即新表M100S17，每年更新1次；包括M2和M7文件，M2–即紙片擴(kuò)散法(DD)文件M2A9，M7–即MIC文件M7A7。M2、M7文件每3年更新一次；使用文件時(shí)應(yīng)注意文件是否已更新，避免使用舊文件造成判斷結(jié)果失誤。2.獲得文件的方法如果購(gòu)買(mǎi)廠家的紙片可向廠家索取標(biāo)準(zhǔn)，每年國(guó)際化會(huì)議也會(huì)頒發(fā)此文件的中心內(nèi)容。（

3、四）、CLSIM100表內(nèi)容：CLSIM100表主要包括版本中的更新要點(diǎn)、各版本抗菌藥物分組、M2紙片擴(kuò)散法用的表、M7MIC用的表、M7MIC用的表及詞匯表等內(nèi)容。2007年主要更新內(nèi)容有關(guān)“或”的章節(jié)，即同類(lèi)抗生素能否相互替代的問(wèn)題；耐藥性的增長(zhǎng)及連續(xù)發(fā)生株的測(cè)試原則；不適于尿中分離菌的藥物，大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)的說(shuō)明；革蘭陰性菌及陽(yáng)性菌的更新部分；質(zhì)量評(píng)估和質(zhì)量控制方面的更新。（五）、試驗(yàn)與報(bào)告中抗菌藥物的選擇M100表將抗菌藥物分成A.B

4、.C.U.O組1、表1和表1A中所列A組藥物被認(rèn)為對(duì)特定菌群的常規(guī)的首選試驗(yàn)組合以及常規(guī)結(jié)果報(bào)告中應(yīng)該出現(xiàn)的藥物。2、B組包含一些臨床上重要的，特別是針對(duì)醫(yī)院內(nèi)感染的藥物，也可以用于首選試驗(yàn)。但是，它們只是被選擇性地報(bào)告，例如當(dāng)細(xì)菌對(duì)A組同類(lèi)藥物耐藥時(shí)，可以選用。其他報(bào)告指征可包括以下幾點(diǎn)：特定的標(biāo)本來(lái)源(如對(duì)腦脊液中的腸道桿菌用三代頭孢菌素或者對(duì)泌尿道的分離菌株用TMPSMZ)；多種細(xì)菌感染；多部位感染；對(duì)A組藥物過(guò)敏、耐受或無(wú)效的病

5、例；為流行病學(xué)調(diào)查目的向感染控制組報(bào)告。3、C組包括替代性或補(bǔ)充性抗菌藥物，可在以下情況進(jìn)行試驗(yàn)：某些單位隱匿局部或廣泛流行的對(duì)數(shù)種基本藥物耐藥的菌株；治療對(duì)基本藥物過(guò)敏的患者；治療少見(jiàn)菌的感染(如氯霉素對(duì)沙門(mén)菌屬或某些假單胞菌屬)；為流行病學(xué)目的向感染控制組報(bào)告。4、U組(“泌尿道”)列出了某些僅用于治療泌尿道感染的抗微生物藥(如呋喃妥因和某些喹諾酮類(lèi)藥物)。除泌尿道，其它感染部位分離的病原菌不用此組藥物進(jìn)行試驗(yàn)。5、O組(“其它”)

6、對(duì)該組細(xì)菌有臨床適應(yīng)癥但一般不允許常規(guī)試驗(yàn)與報(bào)告的藥物。6、Inv組(“研究性”)對(duì)該菌群作研究用且尚未經(jīng)FDA批準(zhǔn)的藥物。（六）、試驗(yàn)操作的基本原則1.臨床標(biāo)本不能直接做藥敏試驗(yàn)，目的以準(zhǔn)確結(jié)果回報(bào)臨床。2.不應(yīng)在同一平板做混合菌藥敏試驗(yàn)。3.與感染無(wú)關(guān)菌株（定植菌）不做藥敏試驗(yàn)。4.判斷標(biāo)準(zhǔn)：一菌一藥一規(guī)則。二、方法分類(lèi)簡(jiǎn)介及標(biāo)準(zhǔn)化操作流程藥敏試驗(yàn)分為以下實(shí)驗(yàn)方法：紙片擴(kuò)散法、Etest法、瓊脂對(duì)倍稀釋法、肉湯對(duì)倍稀釋法、儀器法。（

7、一）紙片擴(kuò)散法主要介紹內(nèi)容包括：紙片擴(kuò)散法的原理、培養(yǎng)基的制備、接種物的制備及接種、貼藥敏紙片、孵育與判讀。1、KB法原理：將干燥的浸有一定濃度抗菌藥物的濾紙片放在已接種一定量某種細(xì)菌ENTEROCOCCI。紙片順序可做調(diào)整，如：測(cè)定E.coli和Klebsiellapneumoniae時(shí)CAZ、CTX紙片貼在含酶抑制劑的紙片如AMC旁邊，初步提示是否產(chǎn)ESBLs。2.在接種好的瓊脂平板上貼加紙片注意要點(diǎn)將事先確定的抗微生物藥組合的紙片

8、分貼到接種好菌的瓊脂平板表面。每個(gè)紙片應(yīng)與瓊脂表面完全接觸，并且應(yīng)均勻分布，使其中心間距不小于24mm貼完紙片后，應(yīng)在15分鐘內(nèi)，將平板反轉(zhuǎn)過(guò)來(lái)，置于35℃孵箱中。注意事項(xiàng)：1.150mm平板所貼紙片不應(yīng)超過(guò)12個(gè)，100mm的不應(yīng)超過(guò)5個(gè)，嗜血桿菌要求150mm平板貼紙片不應(yīng)超過(guò)9張，100mm平皿貼紙片不應(yīng)超過(guò)4張。2.紙片一但接觸了瓊脂表面，就不應(yīng)再挪動(dòng)位置。3.除嗜血桿菌，淋球菌、鏈球菌、腦膜炎奈瑟氏外，平板不應(yīng)在CO2含量高的

9、空氣中孵育，因?yàn)槠浣忉尳Y(jié)果是根據(jù)普通空氣中的孵育結(jié)果研究出的，而CO2會(huì)顯著改變某些藥物的抑菌圈大小。5、判讀平板和解釋結(jié)果孵育1618小時(shí)后，檢查每一塊平板，如果平板劃線滿意，接種物準(zhǔn)確無(wú)誤，抑菌圈應(yīng)為正圓形，菌落應(yīng)相互融和生長(zhǎng)。則可以開(kāi)始記錄抑菌環(huán)大小。如果出現(xiàn)明顯的單個(gè)菌落，說(shuō)明接種量太少，必須重復(fù)試驗(yàn)。注意：葡萄球菌或腸球菌應(yīng)在投射光的照射下判讀，變形桿菌屬會(huì)攀延生長(zhǎng)，應(yīng)讀大的抑菌環(huán)。下圖所示為理想的試驗(yàn)結(jié)果。6、測(cè)量工具游標(biāo)卡

10、尺與普通直尺圖中所示為經(jīng)常用到的測(cè)量工具，注意用直尺測(cè)量時(shí)應(yīng)通過(guò)紙片的中心，同時(shí)盡量貼近平皿；游標(biāo)卡尺只需讀到mm，測(cè)量時(shí)也應(yīng)盡量貼近平皿。7、KB試驗(yàn)中常見(jiàn)的錯(cuò)誤來(lái)源KB試驗(yàn)中常見(jiàn)的錯(cuò)誤來(lái)源有抄錄數(shù)據(jù)時(shí)的書(shū)寫(xiě)錯(cuò)誤，測(cè)量抑菌圈直徑的讀數(shù)錯(cuò)誤，菌株有污染，錯(cuò)誤的孵育溫度或空氣條件，試驗(yàn)用培養(yǎng)基的質(zhì)量不合格，尤其厚度，紙片在試驗(yàn)室取用或貯存的過(guò)程中失效，接種菌懸液太濃或太淡，判讀標(biāo)準(zhǔn)錯(cuò)誤。(二)Etest試驗(yàn)1.原理：E試驗(yàn)(Etest)是