自適應(yīng)演化及耐藥惡性瘧原蟲(chóng),妊娠相關(guān)瘧疾和基因型：9 年的成果來(lái)自queerpam 研究

1、翻譯：王國(guó)勝 1/8原文作者 原文作者： Steve M. TaylorMalcolm Molyneuxd,f, Feiko O. ter Kuileg,h, Stephen J. Rogersonc, Steven R. MeshnickaaDepartment of Epidemiology, Gillings School of Global Public Health, University of North Carolina,

2、 Chapel Hill, NC, USAbDivision of Infectious Diseases and International Health, Duke University Medical Center, Durham, NC, USAcDepartment of Medicine (RMH/WH), University of Melbourne, AustraliadMalawi–Liverpool–Wellcom

3、e Trust Clinical Research Programme, College of Medicine, Blantyre, MalawieDepartment of Community Health, College of Medicine, Blantyre, MalawifSchool of Tropical Medicine, University of Liverpool, UKgChild and Reproduc

4、tive Health Group, Liverpool School of Tropical Medicine, UKhDepartment of Infectious Diseases, Tropical Medicine, and AIDS, Academic Medical Center, University of Amsterdam, Netherlands感染、遺傳與進(jìn)化 感染、遺傳與進(jìn)化自適應(yīng)演化及耐藥惡性瘧原蟲(chóng)，妊娠相

5、關(guān)瘧疾和 自適應(yīng)演化及耐藥惡性瘧原蟲(chóng)，妊娠相關(guān)瘧疾和基因型： 基因型：9 年的成果來(lái)自 年的成果來(lái)自 QuEERPAM 研究 研究1.簡(jiǎn)介 簡(jiǎn)介妊娠相關(guān)瘧疾 (PAM) 可能每年會(huì)導(dǎo)致 20 萬(wàn)嬰兒(凱蒂 et al.，2001 年)，它是影 響新生兒生命健康的可預(yù)防因素中最重要的一個(gè)。在撒哈拉以南非洲瘧疾流行 的地區(qū)，接受兩到三個(gè)療程的磺胺多辛-乙胺嘧啶 (SP)作為間歇預(yù)防性治療，能 夠降低產(chǎn)婦瘧疾、孕產(chǎn)婦貧血和低出生體重風(fēng)險(xiǎn) (v

6、an Eijk et al.,2004)。雖然抗 SP 惡性瘧原蟲(chóng)株流行于整個(gè)撒哈拉以南非洲 (Sridaran et al.，2010 年)，但 SP 仍然一直可以有效地防止大多數(shù)不良分娩的的后果 (ter Kuile et al.，2007 年)。 瘧原蟲(chóng)對(duì) SP 的抗藥性與單核苷酸多態(tài)性 (SNPs) ，二氫 dhfr（dhfr）和喋 （dhps）合成酶在這種寄生蟲(chóng)種群中的積累有關(guān)(皮科特 et al.2009)。這些突變 廣泛分

7、布在撒哈拉以南非洲 (Sridaran et al.，2010 年)；對(duì)受寄生蟲(chóng)影響地區(qū)的 人類遺傳研究表明，其中大多數(shù)不源自重復(fù) 突變，而是來(lái)源于抗性單倍型的傳 播(羅珀等人，2004 年;麥加 et al.，2007;皮爾斯 et al.2009 年)。該研究討論了【Infection, Genetics and Evolution】關(guān)鍵字： 關(guān)鍵字：瘧疾、妊娠相關(guān)瘧疾、耐藥寄生蟲(chóng)的進(jìn)化 摘要： 摘要： 周效磺胺-乙胺嘧啶 (SP)

8、 已被廣泛用于控制非洲的瘧疾，而寄生蟲(chóng)已對(duì)藥物產(chǎn)生抗藥性這一事實(shí)在分子層面上的證據(jù)也已確鑿無(wú)疑。然而人們對(duì)時(shí)間之于惡性瘧原蟲(chóng)的選擇效應(yīng)還不是很清 楚。自 1997 年至 2006 年，我們?cè)隈R拉維布蘭太爾一家醫(yī)院通過(guò)調(diào)查孕婦的抗藥性，按照時(shí)間順序 斷層的方式進(jìn)行了這項(xiàng)瘧疾的變化研究。惡性瘧原蟲(chóng)的基因的特征在于其遺傳多樣性、耐藥突變和 選擇作用對(duì)產(chǎn)生這些突變基因的作用。五二氫葉酸還原酶和喋合成酶基因突變開(kāi)始于 2005 年；高 度抗性的

9、SP-五級(jí)抗性突變體單倍體類型則從 19%增加到 100%。這些基因型在自然選擇中的優(yōu)勢(shì) 來(lái)自其與選擇系數(shù)的相關(guān)性：選擇對(duì)所有突變等位基因陽(yáng)性、單倍型與 SP 五級(jí)抗性突變體單倍型的 相對(duì)適合度是 0.139(95%C.I.0.067 — — 為 0.211)，這明顯說(shuō)明它在選擇中的有利地位。但是具有更 高水平抗性的抗 SP 的突變體并沒(méi)有出現(xiàn)。SP 抗性單倍型迅速擴(kuò)散到整個(gè) 瘧原蟲(chóng)種群，并感染了孕 婦；該基因型已經(jīng)廣泛分布于馬拉維地區(qū)

10、。這些結(jié)果說(shuō)明了為懷孕采取新型預(yù)防措施的迫切需要。翻譯：王國(guó)勝 3/8將每個(gè)樣本中的三個(gè)樣品各自置于一個(gè)獨(dú)立性很 好的 96 孔板塑料盤(pán)中。基因組 DNA (gDNA) 是用 一個(gè)真空多支管借助于 invitrogen Purelink 96 工 具包提取的。 目的基因 dhfr 和 dhps 生成于兩個(gè)分開(kāi)的擴(kuò)增反 應(yīng)；前者使用了 300nm 的探針 51- F(TGAGGTTTTTAATAACTACACATTTAGAGGTCT)，

11、500nm 的探針 164-R (TCGCTAACAGAAATAATTTGATACTCAT) 12.5μL 的 Qiagen HotStarTaq （美國(guó) CA 瓦倫西亞的 Qiagen）和 來(lái)自一個(gè) 25μL 反應(yīng)的 5μL 的 gDNA。 后者用了 900 nm 的探針 437-F (TGAAATGATAAATGAAGGTGCTAGTGT)，300 毫 微米的探針 613-R (GTTGTGTATTTATTACAACATTTT

12、GATCATTC) ， 12.5μL 熱 StarTaq 和來(lái)自一個(gè) 25μL 反應(yīng)的 5μL 的 gDNA。循環(huán)條件都 是︰先為 95 ° C 15 m ×（94 ° C ─ 45 s，51 ° C ─ 45 s，72 ° C ─ 1 m) × 45，然后是 72 ° C ─ 10 m。Pfmdr1 基因位點(diǎn)的 測(cè)序則是利用來(lái)自一個(gè) 25μL 反應(yīng)的 5μL 的

13、gDNA 做的連鎖反應(yīng)擴(kuò)增 pfmdr1 基因位點(diǎn)的 5’ 端的一個(gè)片段 (Vinayaket al.2010)。所有的反應(yīng) 都進(jìn)行了或積極或消極的合適的控制。分離的各 部分反應(yīng)的方法被用于 gDNA 提取、反應(yīng)盤(pán)的制 備、 擴(kuò)增碎片的分析以及過(guò)濾吸液管等，它被用 于所有的步驟。 我們?yōu)樽C實(shí)擴(kuò)增產(chǎn)物，對(duì) PCR 產(chǎn)物進(jìn)行了電泳；譜帶出現(xiàn)于 500 bp，600 bp 或 500 bp 處，就分別證實(shí)了片段 dhfr、dhps 和 p

14、fmdr1 的生成。 PCR 產(chǎn)物雙向測(cè)序使用的是 ABI BigDye，它可用于在瓊脂糖凝膠上譜帶計(jì)數(shù)和 大小測(cè)量。它有兩個(gè)獨(dú)立的測(cè)量裝置，用以發(fā)現(xiàn)差異并進(jìn)行綜合給出測(cè)量結(jié)果。 3.結(jié)果 結(jié)果3.1.人口和臨床數(shù)據(jù) 關(guān)于從 1997 年至 2005 年的總共 189 名婦女的完整的數(shù)據(jù)是可用的，其中每年 人數(shù)從 1997 年的 5 人到 2001 年和 2004 年的 42 人不等。整個(gè)研究過(guò)程中， 樣本的平均年齡一直維持在 21.4