炭樣小單孢菌JXNU-1中核苷類抗生素生物合成相關蛋白的篩選.pdf

1、實驗室在前期研究中篩選到一株具有廣譜抗菌活性的炭樣小單孢菌JXNU-1，其發(fā)酵所產核苷類抗生素對常見的 G+和 G-細菌均有抑制作用，但該抗生素的生物合成與分子調控機制尚不清楚。為探尋炭樣小單孢菌JXNU-1中抗生素的生物合成與分子調控機制，本文采用相對和絕對定量同位素標記（isobaric tags for relative and absolute quantitation，iTRAQ）技術對炭樣小單孢菌 JXNU-1分泌抗生素前后

2、期的蛋白質組進行分析，主要結論如下：
　?。?）共鑒定出炭樣小單孢菌菌體蛋白2390個，獲得172個差異表達蛋白，產物合成期上調表達蛋白76個，下調表達蛋白96個；
　?。?）根據蛋白質組學分析，上調蛋白中含有12個與抗生素合成密切相關蛋白，分別是ABC轉運器底物結合蛋白、ABC轉運器 ATP結合蛋白、糖基轉移酶、P450單加氧酶、S-腺苷甲硫氨酸依賴的甲基轉移酶、甲基轉移酶和絲氨酸羥甲基轉移酶。利用實時熒光定量 PCR（r

3、eal-time quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR）技術對篩選出的相關蛋白的mRNA定量分析，結果表明這12個基因均為表達上調基因，與蛋白的表達趨勢相符；
　?。?）采用生物信息學方法對上述12個抗生素合成相關蛋白進行基因定位，結果表明相關蛋白分布在5個抗生素合成相關基因簇中，且Cluster2被推測為炭樣小單孢菌 JXNU-1生物合成抗生素的基因簇。
　　上述研究