HDAC3在H9C2細胞缺血再灌注損傷中的表達及TSA干預機制.pdf

1、目的：
　　缺血-再灌注損傷（ischemia reperfusion injury，I/R）是指部分組織細胞經歷了此階段，恢復血流和氧供后，組織損傷卻更為加重，發(fā)生組織結構破壞和功能代謝障礙的不可逆損傷現象，但發(fā)病機制尚不清楚。組蛋白去乙酰化酶（Histone deacetylase, HDACs）參與IR發(fā)病過程。HDACs可將基因的表達激活，調控染色質結構和基因表達，使組蛋白去乙?；ヒ阴；瘎t在轉錄阻遏過程中起作用，不同亞

2、型的HDACs發(fā)揮不同的功能作用。曲古霉素A（Trichostatin A, TSA）作為HDACs的抑制劑，是被發(fā)現的第1個能抑制HDAC活性以及已知最為有效的化合物。本實驗探究HDAC3在細胞缺血再灌注損傷中的作用，TSA通過調控干預H9C2心肌細胞IR損傷中的表達，并進行HDAC3部分機制研究，為臨床防治再灌注損傷提供新思路和新的研究途徑。
　　方法：
　　選取SD大鼠H9C2細胞株進行研究，置于正常培養(yǎng)箱中，選取對數

3、生長期細胞，采用EDTA胰酶液制成細胞懸液后，進行細胞傳代和接種。本實驗分為以下3組：①正常對照組、②缺血/再灌注(I/R)組、③缺血/再灌注(I/R)+TSA組；參閱相關文獻，模擬心肌細胞I/R過程，進行實驗。根據以上分組，每組各設6個復孔。將H9C2心肌細胞以1×104/孔的密度接種于96孔板，待細胞貼壁3 h后吸出培養(yǎng)液，正常對照組、I/R組、I/R+TSA組每孔各加入200μL DMEM細胞培養(yǎng)液，各組細胞經處理后繼續(xù)培養(yǎng)。MT

4、T法檢測H9C2細胞增殖活力；檢測培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(LDH)水平；Western Blotting法測定H9C2細胞內HDAC3蛋白表達水平；實時熒光定量PCR檢測H9C2細胞HDAC3 mRNA表達情況。
　　結果：
　　MTT法檢測結果顯示:與正常對照組相比較，I/R組、I/R+TSA組抑制率均顯著提高，并且I/R顯著高于I/R+TSA組；I/R組LDH活性明顯高于正常對照組，I/R+TSA組顯著低于I/R組；West

5、ern blotting檢測顯示I/R組、 I/R+TSA組HDAC3蛋白表達明顯高于正常對照組，I/R+TSA組顯著低于I/R組；實時熒光定量PCR檢測組、I/R+TSA組HDAC3的mRNA表達明顯高于正常對照組，I/R+TSA組顯著低于I/R組。
　　結論：
　　通過檢測心肌細胞增殖活性、細胞外LDH含量證實了缺血再灌注對心肌細胞活力的影響。與正常對照組比較，I/R組、I/R+TSA組中HDAC3 mRNA以及蛋白表達