染料木素對(duì)腎缺血損傷的作用及機(jī)制的研究.pdf

1、目的：缺血再灌注損傷是臨床上一種復(fù)雜的病理生理過程，是急性腎損傷（AKI）的主要病因，在臨床上具有高發(fā)病率和致死率。染料木素是從豆科植物中提取出來(lái)的活性成分，具有廣泛的生物化學(xué)和藥理活性，在腦、小腸缺血再灌注損傷中的保護(hù)作用已得到證實(shí)。但目前染料木素在腎臟缺血再灌注損傷中的保護(hù)作用尚未得到證實(shí)。SIRT1,是 NAD+依賴的去乙酰化酶，已有研究證實(shí) SIRT1在腎臟疾病中的保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)旨在通過小鼠腎臟缺血再灌注損傷模型探討染料木素對(duì)

2、腎臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其可能的機(jī)制。
　　方法：（1）將小鼠隨機(jī)分為5組：假手術(shù)組（Sham）、模型組（I/R）、染料木素低劑量組（G5）、染料木素中劑量組（G10）、染料木素高劑量組（G15）。染料木素預(yù)處理組在手術(shù)操作前30分鐘尾靜脈染料木素(染料木素溶于2％DMSO)，劑量分別為5 mg/kg、10 mg/kg和15 mg/kg。用血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）來(lái)檢測(cè)小鼠腎功能改善情況，用HE和TUNEL檢測(cè)小鼠

3、腎小管損傷程度和腎臟組織中凋亡細(xì)胞的表達(dá)情況, PCR法檢測(cè)小鼠腎臟組織中SIRT1表達(dá), Western blotting檢測(cè)SIRT1，Cleaved caspase-3的表達(dá)，同時(shí)用IHC檢測(cè)SIRT1,PCNA的表達(dá)，
　　（2）將小鼠隨機(jī)分為4組：模型組（Vehicle）、對(duì)照組（sirtinol）、染料木素高劑量組（G15）、抑制劑組（G15+sirtinol）。用血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）來(lái)檢測(cè)小鼠腎功能，用

4、HE和TUNEL法檢測(cè)小鼠腎小管損傷程度和腎臟組織中凋亡細(xì)胞的表達(dá)情況,同時(shí)用IHC檢測(cè)小鼠腎臟組織中PCNA的表達(dá)，
　　（3）將小鼠隨機(jī)分為4組：模型組（LV-Control）、對(duì)照組（LV-shSIRT1）、染料木素高劑量組（G15）、SIRT1低表達(dá)組（G15+LV-shSIRT1）。用血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）檢測(cè)小鼠腎功能，用HE和TUNEL法檢測(cè)小鼠腎小管損傷程度和腎臟組織中凋亡細(xì)胞的表達(dá)情況。Western

5、 blotting法檢測(cè)小鼠腎臟組織中p53，ac-p53，p21， PCNA的表達(dá)。同時(shí),用IHC檢測(cè)小鼠腎臟組織中SIRT1,PCNA的表達(dá)。
　　結(jié)果：（1）不同濃度染料木素(5,10,15 mg/kg)處理缺血再灌注小鼠，小鼠腎功能得到改善。同時(shí)，染料木素處理后SIRT1蛋白表達(dá)逐漸升高且呈劑量依賴性。此外，染料木素處理后能明顯降低小鼠腎臟細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)細(xì)胞的增殖；（2）SIRT1抑制劑能明顯降低小鼠腎臟PCNA表達(dá)，促