丹參素對小鼠腎臟缺血再灌注損傷的作用和作用機(jī)制的研究.pdf

1、第一部分:建立腎臟缺血再灌注損傷小鼠模型
　　目的:成功建立腎臟缺血再灌注損傷小鼠模型,為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供支持。
　　方法:BALB/c小鼠,6-8周齡,20-25g,雄性,30只,隨機(jī)選擇24只作為腎缺血再灌注損傷模型組,術(shù)后觀察生存率,測血肌酐,切取腎臟進(jìn)行HE染色;其余6只作為對照組只開腹、分離腎蒂,切除右側(cè)腎臟,不做其他任何處理,術(shù)后測血肌酐,切取腎臟進(jìn)行HE染色。
　　結(jié)果:模型組術(shù)后生存率達(dá)91.67％,與對照

2、組比較肌酐的值明顯升高,腎臟出現(xiàn)典型病理損傷。
　　結(jié)論:小鼠腎臟缺血再灌注損傷模型建立成功,術(shù)后生存率較高,腎功能明顯受損,腎臟出現(xiàn)典型病理損傷,符合實(shí)驗(yàn)要求。
　　第二部分:在小鼠腎臟缺血再灌注損傷中丹參素作用的研究
　　目的:明確丹參素在小鼠腎臟缺血再灌注損傷中的作用。
　　方法:BALB/c小鼠,6-8周齡,20-25g,雄性,20只,隨機(jī)分為sham組、IRI組、IRI-15mg組、IRI-30mg組、

3、IRI-60mg組. IRI組、IRI-15mg組、IRI-30mg組、IRI-60mg組根據(jù)第一部分手術(shù)方式建立缺血再灌注損傷模型,其中IRI-15mg組、IRI-30mg組、IRI-60mg組使用不同劑量丹參素進(jìn)行干預(yù),術(shù)后采集血清和腎臟等標(biāo)本,腎組織標(biāo)本通過HE染色觀察腎臟組織形態(tài)學(xué)變化;檢測血清標(biāo)本肌酐、尿素氮的值。結(jié)果: IRI-30mg組(113.95+2.91、48.44+1.81)、IRI-60mg組(86.12+3.1

4、3、40.63+3.49)的肌酐、尿素氮水平均低于 IRI組(169.54+5.15、71.48+4.92),結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001、P<0.001;P<0.001、P<0.001);IRI-15mg組、IRI-30mg組、IRI-60mg組之間進(jìn)行比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001、P<0.01;P<0.001、P<0.01);IRI-15mg組、IRI-30mg組、IRI-60mg組的病理損傷程度依次減輕。結(jié)論:丹參

5、素能夠減輕小鼠腎臟缺血再灌注損傷。
　　第三部分:在小鼠腎臟缺血再灌注損傷中丹參素作用機(jī)制的研究
　　目的:闡明在小鼠腎臟缺血再灌注損傷中丹參素的作用機(jī)制。
　　方法:通過RT-PCR檢測IL-1β、IL-6、TNF-α的表達(dá);通過化學(xué)比色法檢測髓過氧化物酶水平;通過考馬斯亮蘭法檢測腎組織標(biāo)本蛋白濃度;通過黃嘌呤氧化酶法檢測抗氧化酶——超氧化物歧化酶的水平;通過TBA法檢測丙二醛含量。
　　結(jié)果:IRI組的MPO

6、活力(17.39+0.58)、IL-1β(2.35+0.06)、IL-6(2.38+0.06)、TNF-α(2.53+0.041)等代表炎癥水平的指標(biāo)明顯高于sham組(11.44+0.54、0.97+0.08、1.03+0.05、0.99+0.06),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05、P<0.001、P<0.001、P<0.001);IRI組的SOD活力(120.57+2.94)顯著低于sham組(156.08+9.06),而IRI組

7、的MDA含量(17.29+0.65)顯著高于sham組(11.11+0.71),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05、 P<0.001、P<0.001、P<0.001).丹參素處理的IRI-60mg組(13.53+0.94)、IRI-30mg組(14.98+0.69)分別與IRI組(17.39+0.58)比較, MPO水平均顯著低于IRI組,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05、P<0.05),IRI-15mg組(16.44+0.63)MPO活力與

8、IRI組(17.39+0.58)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);丹參素劑量組之間進(jìn)行比較,MPO水平:IRI-60mg組

9、.80+0.07、1.82+0.08、1.79+0.05)、IRI-15mg組(2.09+0.13、2.25+0.06、2.19+0.14)分別與IRI組(2.35+0.06、2.38+0.06、2.53+0.041)比較,IL-1β、IL-6、TNF-α的結(jié)果差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);丹參素劑量組之間進(jìn)行比較,IL-1β、IL-6、TNF-α表達(dá):IRI-60mg組

10、(P<0.05);IRI-60mg組與sham組比較,IL-1β、IL-6、TNF-α水平高于sham組(0.97+0.08、1.03+0.05、0.99+0.06),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001、P<0.001、P<0.001).丹參素處理的IRI-60mg組(137.38+2.85)、IRI-30mg組(131.08+3.96)分別與IRI組(120.57+2.94)比較,SOD活力差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05、P<0.0

11、5),MDA含量(13.93+0.78、15.43+0.58)均低于IRI組(17.29+0.65),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05、P<0.05),IRI-15mg組SOD活力(124.42+2.76)、MDA含量(16.58+0.65)與IRI組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05、P>0.05);丹參素劑量組之間進(jìn)行比較, SOD水平: IRI-60mg組>IRI-30mg組>IRI-15mg組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05、P

12、<0.05、P<0.05),MDA含量:IRI-60mg組　　結(jié)論:丹參素減輕小鼠腎臟缺血再灌注損傷的機(jī)制是抗炎、抗