丹參對大鼠脊髓缺血再灌注損傷的作用及機制研究.pdf

1、目的:
　　 通過觀察丹參及丹參酮對大鼠脊髓缺血再灌注損傷脊髓組織中水含量、Ca2+濃度、細胞色素C、半胱氨酸蛋白酶-3及脊髓組織病理變化的影響,探討其對脊髓缺血再灌注損傷的作用及機制,為臨床防治脊髓缺血再灌注損傷提供新的思路及實驗依據。
　　 方法:
　　 ①清潔級健康Sprague-Dawley大鼠160只,雌雄不限,體重270±10g,由上海斯萊克實驗動物有限公司提供,適應性喂養(yǎng)一周后,采用張俐等[1]改進

2、法制備大鼠脊髓缺血再灌注損傷模型,隨機分為:假手術對照組(A組40只)、單純缺血再灌注組(B組40只)、丹參干預組(C組40只)、丹參酮干預組(D組40只)。丹參干預組及丹參酮干預組:分別術前半小時腹腔注射丹參注射液、丹參酮Ⅱa磺酸鈉注射液;單純缺血再灌注組:不注射任何藥物,其余同前面二組;假手術組:麻醉和手術操作同前面三組,但不阻斷腹主動脈即終止手術,室溫下自然蘇醒。均于造模后0.5h、1h、4h、8h、12h時間點取L2-L5脊髓。

3、
　　 ②采用干濕法計算脊髓組織中含水量的變化、原子吸收光譜法檢測Ca2+濃度的變化、免疫組織化學技術檢測脊髓神經細胞細胞色素C的釋放、RT-PCR技術檢測脊髓神經細胞半胱氨酸蛋白酶-3的表達及HE染色光鏡觀察脊髓組織病理變化。
　　 ③利用Spss15.0統(tǒng)計分析軟件和圖像處理系統(tǒng)對所得的數據和圖像進行統(tǒng)計分析。
　　 結果:
　　 ①采用張俐等[1]改進法制作脊髓缺血再灌注損傷模型,缺血完全、重復性好

4、、可操作性強,經濟實用。
　　 ②假手術組脊髓組織中含水量、Ca2+濃度均沒有明顯的變化,脊髓神經細胞細胞色素C未見釋放,半胱氨酸蛋白酶-3未見表達,與單純缺血再灌注組、丹參及丹參酮干預組各相應時間點相比,有顯著性差異(P＜0.05);單純缺血再灌注組半胱氨酸蛋白酶-3的表達顯著升高,細胞色素C的釋放明顯增加,并產生大量的Ca2+,缺血再灌注損傷后脊髓組織明顯水腫,含水量可達74.51％,單純缺血再灌注組與假手術組各相應時間點觀

5、測相比有非常顯著性差異(P＜0.01),與丹參及丹參酮干預組各相應時間點觀測相比有顯著性差異(P＜0.05);丹參及丹參酮干預組半胱氨酸蛋白酶-3的表達明顯降低,細胞色素C的釋放顯著被抑制,細胞內Ca2+含量明顯減少,脊髓組織水腫得到顯著改善,水含量顯著減少,與假手術組及單純缺血再灌注組各相應時間點觀測相比有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 結論:
　　 ①張俐等[1]改進法制備脊髓缺血再灌注損傷模型,重復性好,缺血完

6、全,可操作性強,是研究脊髓缺血再灌注損傷的理想模型,值得推廣應用。
　　 ②在脊髓缺血再灌注損傷中,鈣離子、細胞色素C、半胱氨酸蛋白酶-3均參與了脊髓缺血再灌注損傷的病理過程,丹參及丹參酮可明顯減輕脊髓缺血再灌注損傷引起的脊髓水腫,維持細胞內鈣離子的平衡,減少線粒體釋放細胞色素C,抑制半胱氨酸蛋白酶-3的表達,從而對脊髓缺血再灌注損傷有很好的保護作用。其保護作用及機制可能與降低脊髓含水量、降低鈣離子濃度、減少線粒體釋放細胞色素C