小檗堿下調(diào)Nrf2活性抑制高糖誘導(dǎo)的甲狀腺乳頭狀癌K1細(xì)胞增殖的研究.pdf

1、第一章高糖對甲狀腺乳頭狀癌K1細(xì)胞增殖及PI3K/Akt/Nrf2信號通路的影響
　　研究目的：
　　觀察不同濃度葡萄糖對甲狀腺乳頭狀癌K1細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用；初步探討高糖對甲狀腺乳頭狀癌K1細(xì)胞核因子-E2相關(guān)因子2（nuclear factor erythroid2-related factor2, Nrf2）蛋白表達(dá)及核轉(zhuǎn)位的影響并研究其可能的上游信號通路。
　　研究方法：
　　1.以不同濃度葡萄糖（5.5

2、、10、25、50）mmol/L干預(yù)K1細(xì)胞，分別于12、24、36、48h采用MTT比色分析法檢測各組K1細(xì)胞增殖率，同時設(shè)相同滲透壓組作為對照。
　　2.根據(jù)MTT結(jié)果，將甲狀腺乳頭狀癌K1細(xì)胞分為正糖組（5.5mmol/L葡萄糖）、高糖組（25mmol/L葡萄糖）和高滲組（25mmol/L甘露醇），各組均分別于0、12、24、48h提取細(xì)胞，采用Western Blot法檢測Nrf2、磷脂酰肌醇-3激酶(phosphoino

3、sitide3-kinase, PI3K）、蛋白激酶B（protein kinase B, Akt）和磷酸化Akt（phosphorylated-Akt, p-Akt）表達(dá)水平；采用細(xì)胞免疫熒光法分析各組Nrf2在細(xì)胞內(nèi)的分布情況；使用Spearman相關(guān)性分析法檢測高糖作用下K1細(xì)胞增殖分別與Nrf2、PI3K蛋白和p-Akt/Akt的相關(guān)性。
　　研究結(jié)果：
　　1.隨葡萄糖濃度升高，K1細(xì)胞增殖率改變，25mmol/L

4、葡萄糖濃度下K1細(xì)胞增殖達(dá)到峰值(148.76±5.19)％，50mmol/l葡萄糖濃度時K1細(xì)胞增殖率下降(84.72±3.26)%，與5.5mmol/l葡萄糖濃度時K1細(xì)胞增殖率比較均有統(tǒng)計學(xué)差異（p<0.01）。
　　2.同一葡萄糖濃度作用下隨時間延長K1細(xì)胞增殖率發(fā)生改變，12h明顯升高，24h達(dá)峰，隨后下降。
　　3.25mmol/L葡萄糖干預(yù)K1細(xì)胞24h時，K1細(xì)胞內(nèi)Nrf2、PI3K和p-Akt/Akt表達(dá)及

5、Nrf2在細(xì)胞核分布的比例（Nrf2：0.869±0.075、PI3K：0.783±0.020、p-Akt/Akt：0.480±0.048、Nrf2細(xì)胞核比例：91.2%,260/285）均達(dá)峰值，并且它們隨時間的變化均與K1細(xì)胞增殖率變化同步。
　　4. Spearman相關(guān)性分析表明高糖組Nrf2、PI3K及p-Akt/Akt表達(dá)均與K1細(xì)胞增殖率呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r分別為0.908、0.910、0.916， p<0.01。<

6、br>　　5.滲透壓升高對K1細(xì)胞增殖及Nrf2、PI3K蛋白表達(dá)、p-Akt/Akt等均無明顯影響（p>0.05）。
　　研究結(jié)論：
　　1.甲狀腺乳頭狀癌K1細(xì)胞增殖率隨葡萄糖濃度和作用時間的變化而改變，25mmo/l葡萄糖濃度作用24h時，K1細(xì)胞增殖率達(dá)高峰。
　　2.高糖可能通過促進(jìn)Nrf2表達(dá)及核轉(zhuǎn)位，從而促進(jìn)甲狀腺乳頭狀癌K1細(xì)胞增殖，這可能與高糖上調(diào)K1細(xì)胞內(nèi)PI3K/Akt信號通路有關(guān)。
　　第

7、二章小檗堿抑制高糖誘導(dǎo)的甲狀腺乳頭狀癌K1細(xì)胞增殖及可能的機(jī)制
　　研究目的：
　　觀察小檗堿對高糖誘導(dǎo)的甲狀腺乳頭狀癌K1細(xì)胞增殖的抑制作用；探討小檗堿對高糖誘導(dǎo)的甲狀腺乳頭狀癌K1細(xì)胞Nrf2蛋白表達(dá)及核轉(zhuǎn)位的影響，并初步探究其發(fā)揮作用的可能信號通路，以期為早期防治糖尿病合并甲狀腺乳頭狀癌治療提供新的思路和方法。
　　研究方法：
　　1.高糖（25mmol/L）加入不同濃度的小檗堿（0、10、40、80）μm

8、ol/L共同干預(yù)K1細(xì)胞24h時，采用MTT比色分析法檢測各組K1細(xì)胞增殖情況，設(shè)正糖（5.5mmol/L）作為對照。
　　2.采用Western blot檢測各組Nrf2、PI3K、Akt、p-Akt表達(dá)水平，細(xì)胞免疫熒光法分析各組Nrf2在細(xì)胞內(nèi)的分布，設(shè)正糖（5.5mmol/L）作為對照。
　　研究結(jié)果：
　　1.與正糖組比較，高糖組K1細(xì)胞增殖率、PI3K、p-Akt/Akt、Nrf2表達(dá)及Nrf2在細(xì)胞核分布

9、的比例均顯著升高（增殖率:(126.64±5.41)%vs(87.31±3.67)%; PI3K:(0.425±0.019)vs(0.272±0.039);p-Akt/Akt:(0.446±0.021)vs(0.168±0.035); Nrf2:(0.597±0.014)vs(0.308±0.026); Nrf2細(xì)胞核比例:(93.0%,265/285) vs(23.1%,45/195), p<0.01）。
　　2.與高糖組比較，

10、高糖加入10、40、80μmol/L小檗堿后各組K1細(xì)胞增殖率（(111.76±4.10)%、(70.03±2.18)%、(32.41±3.76)%）均下降（p<0.05），80μmol/L小檗堿組增殖抑制作用最強(qiáng)，同時40μmol/L小檗堿組增殖抑制作用高于10μmol/L小檗堿組。
　　3.高糖加入不同濃度小檗堿后各組PI3K、p-Akt/Akt、Nrf2表達(dá)及Nrf2在細(xì)胞核分布的比例，與高糖組比較均下調(diào)（p<0.05），且