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文檔簡介
1、目的:
膝骨性關節(jié)炎的病理生理有關節(jié)軟骨的變性、脫落,骨質增生及,關節(jié)邊沿的骨贅形成,繼續(xù)發(fā)展成為滑肥厚和關節(jié)囊的增生、它是一種退行性關節(jié)疾病,臨床以關節(jié)疼痛、畸形和活動受限為主要表現(xiàn)。關節(jié)疼痛的難治性,使患者的生活質量受到嚴重影響,所以急需一種新的治療措施。其疼痛的主要機制之一是脊髓中疼痛傳導遞質鈉離子通道Navl.8過度表達,使患者對疼痛的敏感度增高。研究表明,A型肉毒毒素對神經(jīng)病理性疼痛具有較好的止痛作用,但對膝骨性關節(jié)
2、炎的鎮(zhèn)痛效果和其鎮(zhèn)痛的機制,尤其脊髓水平鎮(zhèn)痛機制的研究尚缺乏相應的報道。本研究擬在大鼠骨性關節(jié)炎模型中,通過關節(jié)腔注射A型肉毒毒素,觀察其對大鼠膝骨性關節(jié)炎的鎮(zhèn)痛效果,并觀察脊髓背角鈉離子通道Nav l.8的表達的變化,從脊髓層面闡明其鎮(zhèn)痛機制。以期探索治療膝骨性關節(jié)炎的新的安全有效的方法。對降低人群的病殘率,提高患者的生活質量大有意義。
方法:
選取20只雄性SD大鼠,要求體格健康,身體重量在150~180g之間,
3、予右膝關節(jié)腔內注射4%木瓜蛋白酶溶液0.3ml建立膝骨性關節(jié)炎的動物模型(KOA)。
1.通過建立成功的膝骨性關節(jié)炎大鼠模型,隨機分為2組:BTX-A組(n=10):關節(jié)腔內注射BTX-A0.1IU/5μl及WFI組(n=10):關節(jié)腔內注射無菌用水5μl;Sham組(n=10):非關節(jié)炎模型組。在給藥后不同的時間點(1天、3天、5天),進行自發(fā)疼痛步態(tài)分析及熱痛閾檢測,比較三組之間的變化。
2.在膝骨性關節(jié)炎大鼠疼
4、痛模型上,給予注射A型肉毒毒素或注射用水,第5天后行動物灌注和免疫熒光染色,觀察脊神經(jīng)節(jié)Nav1.8的表達。
3.應用SPSS20.0統(tǒng)計軟件處理全部數(shù)據(jù),采用非參數(shù)秩和檢驗,分析自發(fā)疼痛行為學步態(tài)測試結果。不同測試時間點的同一組大鼠,數(shù)據(jù)用相關樣本參數(shù)檢驗(Friedman Test)分析;用均數(shù)±標準差((x)±s)表示,對資料進行分析時采用t檢驗及方差分析,P<0.05具有統(tǒng)計學意義。
結果:
1.膝
5、骨性關節(jié)炎模型制作:在大鼠右膝關節(jié)內注射4%木瓜蛋白酶溶液0.3ml,實驗第5天80%大鼠已有不同程度出現(xiàn)關節(jié)腫脹及活動受限,7d達到高峰。
2.自發(fā)疼痛檢測
2.1、20只膝骨性關節(jié)炎模型大鼠分兩組,在右側膝關節(jié)腔分別注射BTX-A或WFI,在給藥后1天、3天及5天行自發(fā)痛檢測。在給藥后第5天,與WFI組相比, BTX-A組的大鼠自發(fā)疼痛行為改善,差異有顯著統(tǒng)計學意義。
2.2、膝骨性關節(jié)炎大鼠在注射A型
6、肉毒毒素后1天、3天及5天,分別進行自發(fā)疼痛步態(tài)分析的檢測。注射A型肉毒毒素后時間不同,自發(fā)疼痛行為改善也不同,差異有統(tǒng)計學意義。給予BTX-A后的1,3,5天,不同天數(shù)之間兩兩比較,具有統(tǒng)計學意義,且伴隨時間天數(shù)的延長(≤5天),自發(fā)疼痛行為改善越明顯。
3.熱痛閾檢測
3.1、三組大鼠:Sham組、關節(jié)炎+WFI組、關節(jié)炎+BTX-A組分別在注射后第1、3、5天測試大鼠右足熱痛閾值。在實驗觀察的時間內,模型組與S
7、ham組比較,熱刺激撤足閾值均有所降低。
3.2、熱痛閾結果顯示:模型組大鼠第1天給予BTX-A注射后,在24小時內大鼠的熱痛閾值開始上升,且隨時間的延長其緩解疼痛效果逐漸明顯,一直可持續(xù)到注射后第5天,與注射用水組比較,BTX-A組熱痛閾明顯高于對照組。實驗結果表明注射BTX-A可緩解疼痛,增加熱痛閾值。
4.脊神經(jīng)節(jié)上Nav1.8蛋白的表達:免疫熒光組織化學結果顯示模型組可上調DRG神經(jīng)元中Nav1.8蛋白表達水
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