ⅢB-Ⅳ期非小細(xì)胞肺癌中醫(yī)寒熱分型與EGFr-TKI耐藥的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：⑴應(yīng)用臨床流行病學(xué)觀察性研究方法，通過(guò)觀察ⅢB/Ⅳ期NSCLC患者EGFR-TKI治療前后中醫(yī)寒熱證候的演變規(guī)律及耐藥時(shí)的中醫(yī)證候特點(diǎn)，驗(yàn)證EGFR-TKI的藥性，探討中醫(yī)寒熱證候與EGFR-TKI治療療效的關(guān)系，進(jìn)一步為研究中藥逆轉(zhuǎn)EGFR-TKI耐藥提供藥物選擇的理論依據(jù)。⑵通過(guò)觀察不同治則中藥復(fù)方（清熱、溫陽(yáng)）聯(lián)合吉非替尼對(duì)EGFR-TKI耐藥細(xì)胞株增殖、凋亡的影響，探索其可能的作用通路，篩選出哪種治則的中藥復(fù)方可以達(dá)到增敏

2、作用，以進(jìn)一步佐證靶向藥物的寒熱屬性，為中藥聯(lián)合靶向藥物發(fā)揮增敏作用提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：①應(yīng)用流行病學(xué)觀察性研究方法，采集新發(fā)或復(fù)發(fā)初治ⅢB/Ⅳ期NSCLC并準(zhǔn)備接受EGFR-TKI治療患者的中醫(yī)四診資料，根據(jù)中醫(yī)理論進(jìn)行寒熱辨證分型，定期隨訪并采取四診資料至EGFR-TKI耐藥（即腫瘤進(jìn)展），建立數(shù)據(jù)庫(kù)，探討EGFR-TKI治療前后寒熱證候的演變規(guī)律及耐藥時(shí)的中醫(yī)證候特點(diǎn)。②以人肺腺癌EGFR-TKI耐藥細(xì)胞株A549、H

3、1650為研究對(duì)象，用吉非替尼分別聯(lián)合溫陽(yáng)、清熱中成藥進(jìn)行干預(yù)，利用MTT法檢測(cè)聯(lián)合藥物對(duì)細(xì)胞增殖的影響，利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)聯(lián)合藥物對(duì)細(xì)胞凋亡的影響，通過(guò)western blot法探討其作用可能的機(jī)制。
　　結(jié)果：⑴患者的吸煙史、病理類型差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。⑵整體分析表明，接受EGFR-TKI治療后大部分患者的證型發(fā)生由寒轉(zhuǎn)熱的改變，治療前31.4％為熱證，68.6％為寒證，隨著服藥時(shí)間的增加，寒證患者的比例逐步下降

4、，熱證患者的比例不斷上升，達(dá)到耐藥這一截點(diǎn)以熱證患者居多(76.2％)。⑶分層分析表明，耐藥時(shí)證型與治療前、服藥1個(gè)月后的證型差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），耐藥時(shí)證型與服藥3個(gè)月、6個(gè)月后的證型差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。⑷年齡、是否吸煙、性別因素對(duì)耐藥時(shí)間影響差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。⑸服藥前熱證的患者中位PFS為1.9個(gè)月，初始寒證患者中位PFS為5.267個(gè)月，初始寒熱證候?qū)τ诏熜?PFS)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞

5、0.05）。⑹A549細(xì)胞:吉非替尼聯(lián)合參附注射液后，對(duì)細(xì)胞增殖差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，金正均Q值法得出兩藥僅有相加作用(0.85＜Q＜1.15)，對(duì)細(xì)胞的凋亡率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。吉非替尼聯(lián)合清開(kāi)靈注射液后，對(duì)細(xì)胞增殖差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但Q值法顯示兩藥聯(lián)合后僅有相加作用(0.85＜Q＜1.15)，細(xì)胞的凋亡率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05），其作用通路尚未發(fā)現(xiàn)。⑺H1650細(xì)胞:吉非替尼聯(lián)合參附注

6、射液后，對(duì)細(xì)胞增殖差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，金正均Q值法得出隨著時(shí)間推移，兩藥由相加作用逐漸變?yōu)檗卓棺饔?48H:0.85＜Q＜1.15，72H: Q＜0.85)，對(duì)細(xì)胞的凋亡率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。吉非替尼聯(lián)合清開(kāi)靈注射液后，對(duì)細(xì)胞增殖差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05)，Q值法顯示兩藥有協(xié)同作用(Q＞1.15)，細(xì)胞的凋亡率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05），其作用機(jī)制可能是通過(guò)下調(diào)EGFR、p-ERK信號(hào)通路傳導(dǎo)實(shí)現(xiàn)的

7、。
　　結(jié)論：①接受EGFR-TKI治療后大部分患者的證型發(fā)生由寒轉(zhuǎn)熱的改變，即隨著服藥時(shí)間的增加，寒證患者的比例逐步下降，熱證患者的比例不斷上升，達(dá)到耐藥這一截點(diǎn)以熱證患者居多，推斷EGFR-TKI的藥性為熱性。②服用EGFR-TKI前患者寒熱證型與療效(PFS)無(wú)相關(guān)性，但初始寒證患者有一定獲益傾向性。③對(duì)于A549細(xì)胞，吉非替尼聯(lián)合參附注射液僅有相加作用，聯(lián)合清開(kāi)靈注射液對(duì)細(xì)胞的抑制率、凋亡率明顯增高，尚未找到其作用機(jī)制通路