羽扇豆懷特酮的合成及其對(duì)前列腺癌DU-145細(xì)胞作用機(jī)制的研究.pdf

1、大豆異黃酮廣泛存在于豆科植物中，是亞洲人飲食的重要組成部分。大豆異黃酮具有廣泛的生物活性，如抗癌，抗氧化，抗血栓形成等。羽扇豆懷特酮(Lup)是一種天然異黃酮類化合物，其結(jié)構(gòu)與大豆異黃酮中的活性成分染料木素十分相似。Lup分布于野生植物如甘草、地果，羽扇豆和非洲紫藤樹等。已有的研究顯示，Lup具有抗菌和抗氧化活性，但其抗癌活性和機(jī)制還未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)首先以染料木素為母體，通過(guò)合成方法得到Lup，進(jìn)而對(duì)其抗癌活性及作用機(jī)制進(jìn)行深入研究。主

2、要的研究工作如下。
　　化合物L(fēng)up的合成。實(shí)驗(yàn)以染料木素為原料，經(jīng)乙酰化，再通過(guò)Mitsunobu反應(yīng)以及克萊森重排反應(yīng)，最后水解得到目標(biāo)化合物L(fēng)up。
　　利用MTT法，評(píng)價(jià)Lup對(duì)人前列腺癌細(xì)胞(DU-145，C4-2，CWR22RN1)、人宮頸癌細(xì)胞(Hela)、人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)、人鼻咽癌細(xì)胞(CNE)、人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)和非洲綠猴腎細(xì)胞(Vero)的細(xì)胞增殖抑制率。結(jié)果顯示Lup對(duì)前列腺癌DU

3、-145細(xì)胞的增殖抑制活性最好，其IC50為23.7μM，又用不同濃度的Lup處理DU-145細(xì)胞24、48和72 h后，細(xì)胞增長(zhǎng)緩慢，呈時(shí)間劑量依賴性。還通過(guò)結(jié)晶紫染色試驗(yàn)觀察了Lup對(duì)DU-145細(xì)胞聚集成群落的影響，發(fā)現(xiàn)Lup能有效抑制DU-145細(xì)胞的聚集及生長(zhǎng)。
　　研究Lup抑制DU-145細(xì)胞增殖的作用機(jī)制:不同濃度的Lup處理DU-145細(xì)胞，Hoechst33258染色，顯微鏡下觀察DU-145細(xì)胞染色質(zhì)皺縮，出

4、現(xiàn)凋亡小體；DAPI染色，流式細(xì)胞術(shù)定量分析Lup對(duì)DU-145細(xì)胞周期的作用，發(fā)現(xiàn)Lup可導(dǎo)致DU-145細(xì)胞的細(xì)胞周期在S和G2/M期阻滯；Annexin V-FITC/PI熒光雙染流式檢測(cè)顯示Lup可誘導(dǎo)DU-145細(xì)胞凋亡；Rhodamine123染色膜電位檢測(cè)Lup可引起DU-145線粒體膜電位(△Ψm)缺失，且經(jīng)流式分析，線粒體內(nèi)活性氧的表達(dá)增加。Western Blot檢測(cè)Lup誘導(dǎo)DU-145細(xì)胞經(jīng)線粒體途徑凋亡相關(guān)蛋白

5、表達(dá)的作用，發(fā)現(xiàn)Lup能上調(diào)Bax,cytochromec,caspase-3,PARP1蛋白的表達(dá)，下調(diào)Bcl-2,procaspase-9,p-Akt的表達(dá)。
　　研究Lup抗血管生成的作用，MTT檢測(cè)表明Lup對(duì)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC的增殖有抑制作用，但毒性比之較DU-145細(xì)胞要低，其IC50為50.5。細(xì)胞劃痕的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Lup對(duì)HUVEC細(xì)胞的遷移有抑制作用；管腔形成實(shí)驗(yàn)顯示Lup能破壞HUVEC細(xì)胞形成的管腔結(jié)構(gòu)。通