維生素D類似物EB1089對前列腺癌DU145細胞的作用研究.pdf

1、研究背景：
　　 前列腺癌在美國是男性最常見惡性腫瘤之一，腫瘤死亡率位居第二。近年來，我國前列腺癌的檢出率已呈明顯上升趨勢。目前，晚期雄激素非依賴型前列腺癌(AIPC)的治療仍是一個難題，尚無理想的治療方法。因此，研究和探索新的治療策略，具有十分重要的臨床意義。
　　 研究表明，Hedgehog(Hh)信號通路的激活與前列腺癌密切相關。人前列腺癌組織表達Hh配體及其下游靶基因Gli。Hh信號通路抑制劑cyclopamin

2、e(環(huán)杷明)能抑制前列腺癌腫瘤細胞增殖、改變其侵襲能力、抑制移植腫瘤的生長并引起消退。但cyclopamine因含量少，合成困難，副作用大，限制了其臨床應用。最近研究發(fā)現(xiàn)維生素D也是一種Hh信號通路抑制劑，以很高的親和力結合Smo，抑制Gli活性，且作用強于cyclopamine。
　　 前列腺癌的多藥耐藥(MDR)是導致其化療失敗的主要原因，腫瘤細胞MDR的發(fā)生與細胞膜上過量表達的ABC轉運蛋白有關，包括P-型糖蛋白(PGP)

3、、多藥耐藥蛋白(MRP)、乳腺癌耐藥蛋白(BCRP)等，它們可以將化療藥物泵出細胞外從而導致腫瘤細胞產生耐藥性。研究表明，Hh通路抑制劑是一種有效的ABC轉運蛋白抑制劑，特別是對PGP、BCRP具有很強的抑制作用。
　　 然而，維生素D可引起高血鈣的副作用影響了其在抗腫瘤領域的臨床應用。EB1089是一種維生素D類似物，具有更強的調節(jié)腫瘤細胞生長、分化的作用，而對血鈣的影響較小。本研究旨在探討EB1089是否作為一種Hh通路抑制

4、劑，通過Hh信號通路途徑抑制雄激素非依賴型前列腺癌DU145細胞生長，逆轉其MDR。
　　 方法與結果：
　　 首先采用MTT法和流式細胞技術檢測EB1089對DU145細胞增殖、細胞周期和凋亡的影響，并與cyclopamine作比較，同時在光鏡和電鏡下觀察細胞形態(tài)學和超微結構變化。結果顯示，EB1089可以抑制DU145細胞的增殖，差異有統(tǒng)計學意義，呈時間和劑量依賴關系，且抑制作用強于cyclopamine。1、10、

5、50、100nmol/L EB1089作用DU145細胞48h后，G0/G1期細胞逐漸增多，而S期細胞逐漸減少，細胞凋亡率逐步增高。EB1089作用后，鏡下可見DU145細胞典型的凋亡形態(tài)學改變：細胞體積縮小，細胞核固縮、裂解，核碎片及凋亡小體形成。
　　 其次，分別用1、10、50、100nmol/L濃度的EB1089作用DU145細胞48h后，采用Real time-PCR和Western blot方法分別檢測DU145細胞

6、Gli1、cyclinD1、BCL-2、Bax mRNA和蛋白的表達變化。結果顯示，EB1089作用48h后，DU145細胞Gli1、cyclinD1、Bcl-2 mRNA和蛋白表達均下降，Bax mRNA和蛋白表達均上調，并呈劑量依賴關系。
　　 最后，MTT法檢測EB1089和多西紫杉醇二者合用對DU145細胞增殖的作用，以及EB1089對耐多西紫杉醇DU145細胞(DU145-DR)化學敏感性的影響；并采用Real tim

7、e-PCR和Western blot方法分別檢測EB1089作用后DU145-DR細胞PGP/MDR1、MRP、BCRP mRNA和蛋白的表達變化，結果顯示，兩藥聯(lián)合對DU145細胞增殖的抑制作用顯著高于兩藥單獨作用；DU145-DR細胞經EB1089作用后對多西紫杉醇的敏感性增加，逆轉倍數(shù)為2.87，相對逆轉效率為70.8％；EB1089作用后，DU145-DR細胞PGP/MDR1、BCRP的表達水平顯著下調。
　　 結論：<

8、br>　　 EB1089可以抑制DU145細胞增殖，抑制作用于強于cyclopamine，EB1089可以阻滯DU145細胞于G1期，誘導DU145細胞凋亡，其作用機制可能是作為一種有效的Hh信號通路抑制劑，通過抑制Hh信號通路，下調Gli1，進而調節(jié)cyclinD1、Bcl-2和Bax的表達來完成。EB1089可以提高耐多西紫杉醇DU145細胞的化學敏感性，有效逆轉其耐藥性，其逆轉機制可能主要通過下調PGP/MDR1、BCRP的表達