抑制MTDH基因?qū)η傲邢侔〥U145細(xì)胞有氧糖酵解影響的研究.pdf

1、前列腺癌是常見的男性泌尿系腫瘤，在美國其發(fā)病率已經(jīng)超過肺癌，成為第一位危害男性健康的腫瘤。晚期前列腺癌常因發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移并容易產(chǎn)生化學(xué)耐藥和雄激素抵抗而發(fā)展為去勢抵抗性前列腺癌。異黏蛋白（metadherin，MTDH）是一個(gè)與腫瘤發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)的癌基因，參與調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲轉(zhuǎn)移、血管生成、抵抗凋亡和化學(xué)耐藥等生物學(xué)行為，其在前列腺癌組織中的表達(dá)明顯高于前列腺增生和正常前列腺組織。腫瘤中不僅存在基因異常，同時(shí)還具有能量代謝異常，

2、偏好有氧糖酵解方式產(chǎn)生能量是腫瘤的一個(gè)重要特征。但在前列腺癌中異常表達(dá)的MTDH是否與腫瘤細(xì)胞糖酵解有關(guān)尚不是十分清楚。因此，本研究擬利用藥物抑制MTDH的表達(dá)和小干擾RNA技術(shù)（small interferingRNA，siRNA）下調(diào)MTDH的表達(dá)，觀察其對(duì)前列腺癌細(xì)胞糖酵解的影響及其分子作用機(jī)制，為MTDH作為前列腺癌的潛在治療靶點(diǎn)提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　實(shí)驗(yàn)一隱丹參酮抑制MTDH表達(dá)對(duì)前列腺癌DU145細(xì)胞中糖酵解的影響

3、
　　目的：探討隱丹參酮抑制MTDH表達(dá)對(duì)前列腺癌DU145細(xì)胞中糖酵解的影響。
　　方法：不同濃度隱丹參酮作用DU145細(xì)胞不同時(shí)間后，MTT檢測各組細(xì)胞的增殖情況；葡萄糖和乳酸檢測試劑盒分別檢測各組細(xì)胞葡萄糖消耗值及乳酸分泌值；Western blot和逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）檢測各組細(xì)胞中MTDH和丙酮酸激酶M2（PKM2）的蛋白和mRNA表達(dá)情況。
　　結(jié)果：隱丹參酮能夠抑制DU145細(xì)胞的增殖，并且呈明顯

4、時(shí)間和劑量依賴性（P<0.05）。隨著隱丹參酮濃度的增加，DU145細(xì)胞對(duì)葡萄糖的消耗值減少，乳酸分泌值也下降（P<0.05）。MTDH和PKM2蛋白的表達(dá)可隨隱丹參酮濃度的增加及作用時(shí)間的延長逐漸下調(diào)，而且隨著作用時(shí)間的延長，MTDH和PKM2 mRNA的表達(dá)量也逐漸下降（P<0.05）。
　　結(jié)論：隱丹參酮能夠抑制前列腺癌DU145細(xì)胞的增殖及其糖酵解水平，其可能機(jī)制是通過下調(diào)MTDH和PKM2的表達(dá)，進(jìn)而抑制細(xì)胞的糖酵解途徑

5、，最終抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。
　　實(shí)驗(yàn)二shRNA下調(diào)MTDH表達(dá)對(duì)前列腺癌DU145細(xì)胞中糖酵解的影響
　　目的：探討利用shRNA下調(diào)MTDH表達(dá)后對(duì)前列腺癌DU145細(xì)胞中糖酵解的影響。
　　方法：建立穩(wěn)定沉默MTDH的前列腺癌細(xì)胞株和空載體細(xì)胞株，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)的改變，細(xì)胞免疫組化、Western blot和逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)檢測干擾效果；MTT檢測MTDH基因下調(diào)對(duì)DU145細(xì)胞增殖的影響；葡萄糖和乳酸

6、檢測試劑盒分別檢測MTDH基因下調(diào)后細(xì)胞葡萄糖消耗值和乳酸分泌值；Western blot檢測MTDH基因下調(diào)后細(xì)胞中AKT、p-AKT、PKM2蛋白的表達(dá)情況，逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測PKM2 mRNA的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：MTDH基因下調(diào)后，細(xì)胞形態(tài)變圓、間距變大，細(xì)胞的增殖能力顯著下降（P<0.05）。細(xì)胞對(duì)葡萄糖消耗和乳酸分泌也明顯減少（P<0.05）。P-AKT和PKM2蛋白的表達(dá)下降，而AKT蛋白的表達(dá)無明顯改變，且PKM2