吳茱萸堿對人前列腺癌DU145細(xì)胞的體外作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的:在體外研究吳茱萸堿(evodiamine，evo)對人前列腺癌DU145細(xì)胞增殖、凋亡的影響，并探討其可能作用機(jī)制。
　　 方法:細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)體外培養(yǎng)人前列腺癌DU145細(xì)胞，用不同濃度的吳茱萸堿進(jìn)行干預(yù)。MTT法檢測各濃度吳茱萸堿對人前列腺癌DU145細(xì)胞增殖的影響;流式細(xì)胞術(shù)測定吳茱萸堿對細(xì)胞周期和凋亡的影響;倒置光學(xué)顯微鏡下觀察DU145細(xì)胞形態(tài)變化;免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測前列腺癌DU145細(xì)胞內(nèi)PCNA的表達(dá)情況;We

2、sternBlot方法檢測t-ERK、p-ERK及CleavedCaspase-3的表達(dá)。用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理所得結(jié)果，以P＜0.05為顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　 結(jié)果:
　　 1.吳茱萸堿對DU145細(xì)胞增殖具有抑制作用:MTT顯示，DU145細(xì)胞增殖活力被吳茱萸堿所抑制(P＜0.05)。Western印跡及免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果顯示，DU145細(xì)胞經(jīng)過吳茱萸堿處理后細(xì)胞內(nèi)增殖標(biāo)志物PCNA表達(dá)降低，細(xì)胞內(nèi)總的ER

3、K1/2蛋白表達(dá)水平無明顯變化，而磷酸化ERKl/2蛋白與對照組相比水平下降。
　　 2.吳茱萸堿對DU145細(xì)胞周期的影響:流式細(xì)胞分析技術(shù)結(jié)果顯示，經(jīng)過吳茱萸堿作用24小時(shí)后各個濃度組(10-7M、106M、10-5M)所處理結(jié)果顯示各周期內(nèi)的細(xì)胞數(shù)量發(fā)生明顯變化，其中G1、S期細(xì)胞明顯減少而G2/M期細(xì)胞積累增多，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即吳茱萸堿使DU145細(xì)胞增殖阻滯于G2/M期。
　　 3.吳茱萸堿可誘導(dǎo)DU14

4、5細(xì)胞凋亡:流式細(xì)胞分析技術(shù)結(jié)果顯示，吳茱萸堿各濃度組(10-7M、10-6M、10-5M)作用于DU145細(xì)胞72h后，凋亡細(xì)胞明顯增多，且凋亡率隨著藥物濃度的增加而增加，呈現(xiàn)藥物濃度依賴方式，經(jīng)過各濃度組吳茱萸堿處理后的DU145細(xì)胞所測得的凋亡率結(jié)果差異使用單因素方差分析有顯著性差異(P＜0.05)。Western印跡結(jié)果表明，不同濃度吳茱萸堿處理DU145細(xì)胞24小時(shí)后，CleavedCaspase-3的相對表達(dá)量明顯升高，并隨