穿心蓮內(nèi)酯對人前列腺癌DU145細胞增殖、侵襲及Il-6表達的影響.pdf

1、目的:當今，前列腺癌(ProstatecancerPCa)已成為全范圍內(nèi)的一個主要健康問題，是男性癌癥相關(guān)死亡的第二大原因。雄激素阻斷治療是治療復發(fā)性和轉(zhuǎn)移性前列腺癌的主要方法，然而大部分激素依賴性PCa經(jīng)治療數(shù)月或數(shù)年后，腫瘤將進展為激素非依賴性前列腺癌(Hormone-refractoryprostatecancer,HRPC)，目前尚無有效治療HRPC的方法。了解前列腺癌進展的分子發(fā)展機制及前列腺癌細胞如何逃避凋亡程序產(chǎn)生無控性生

2、長的行為非常重要。在研究并發(fā)現(xiàn)越來越多的針對前列腺癌疾病的藥物作用靶點時，我們也需要尋求能導致前列腺癌細胞生長停滯和凋亡的新藥物。
　　 近年來研究證實，在前列腺癌發(fā)生和進展過程中，參與炎癥反應的細胞因子白細胞介素6(interleukin-6IL-6)對于雄激素受體(androgenreceptorAR)激活，腫瘤細胞生長和分化起到重要作用，這可能成為治療前列腺癌疾病的一個潛在作用靶點。穿心蓮內(nèi)酯(Andrographohol

3、ideAGP)是從植物穿心蓮中提取的一種天然化合物，它廣泛應用于我國和印度的傳統(tǒng)醫(yī)學當中，具有抗菌、消炎、抗瘧、抗癌等多種藥物活性。目前，穿心蓮內(nèi)酯對前列腺癌細胞的作用及機制探討國內(nèi)外少見報道。本課題擬研究藥物穿心蓮內(nèi)酯對前列腺癌DU145細胞增殖活性、細胞侵襲能力以及其對細胞IL-6、STAT3磷酸化表達水平的影響，并探討其可能的作用機制，以求為激素非依賴性前列腺癌的治療尋求新的有效藥物并對IL-6/STAT3信號傳導通路所進行的腫瘤

4、靶向治療研究提供基礎資料。
　　 方法:體外培養(yǎng)人前列腺癌DU145細胞，用不同濃度的穿心蓮內(nèi)酯進行處理。用MTT法及細胞計數(shù)法進行細胞增殖分析;光學顯微鏡下觀察DU145細胞形態(tài)變化。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗法(ELISA法)檢測細胞IL-6蛋白表達水平;采用涂有Matrigel膠的Transwell小室模型對前列腺癌細胞DU145進行體外侵襲檢測。采用免疫印跡法(westernblot)檢測DU145細胞p-STAT3的表達變化

5、。結(jié)果運用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.AGP抑制前列腺癌DU145細胞增殖，抑制細胞侵襲能力
　　 不同濃度的AGP干預培養(yǎng)前列腺癌DU145細胞48小時后，MTT和細胞計數(shù)分析顯示:AGP抑制DU145細胞增殖及細胞活力(P＜0.05)。顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)DU145細胞經(jīng)AGP處理后，細胞凋亡明顯增多，細胞縮小變圓，細胞膜出泡等。Transwell實驗

6、證明與對照組比較，AGP抑制前列腺癌DU145細胞的體外侵襲作用(P＜0.05)。
　　 2.AGP抑制前列腺癌DU145細胞IL-6表達
　　 不同濃度AGP對前列腺癌DU145細胞進行干預培養(yǎng)24小時后，ELISA法檢測細胞培養(yǎng)上清液中IL-6蛋白水平。結(jié)果顯示，隨著AGP濃度的升高和培養(yǎng)時間的延長，細胞IL-6表達受抑制程度逐漸升高，AGP呈劑量依賴性抑制DU145細胞IL-6表達。
　　 3.AGP抑制S

7、TAT3磷酸化水平
　　 在AGP處理DU145細胞后，Westernblot檢測結(jié)果顯示:STAT3磷酸化水平較對照組顯著受抑（P＜0.01）。因此推測，STAT3信號轉(zhuǎn)導通路可能是AGP對DU145細胞作用的重要途徑，STAT3磷酸化水平的降低可能與AGP抑制DU145細胞IL-6表達有關(guān)。
　　 結(jié)論:穿心蓮內(nèi)酯可抑制人雄激素非依賴性前列腺癌DU145細胞增殖，抑制細胞侵襲能力，其作用機制可能與穿心蓮內(nèi)酯抑制白細胞