運(yùn)用CLARITY技術(shù)進(jìn)行神經(jīng)疾病模型鼠的研究.pdf

1、光的散射性一直是阻礙生物大組織深度成像的主要因素，盡管目前出現(xiàn)許多旨在降低組織光散射的組織透明技術(shù)，但是這些技術(shù)或多或少存在技術(shù)缺陷而需要進(jìn)一步改進(jìn)。2013年報(bào)道的CLARITY技術(shù)則是一種全新的組織透明技術(shù)，和傳統(tǒng)技術(shù)存在本質(zhì)區(qū)別。這項(xiàng)技術(shù)首次將大腦組織轉(zhuǎn)變成水凝膠結(jié)構(gòu)并去除腦內(nèi)脂質(zhì)而使腦組織變透明，去除脂質(zhì)能夠降低光散射從而提高腦成像深度，同時(shí)大分子抗體標(biāo)記物也更容易進(jìn)入組織內(nèi)部。CLARITY技術(shù)自被報(bào)道以來(lái)就以其顯著的優(yōu)勢(shì)吸引

2、著世界各地課題組對(duì)它進(jìn)行完善改進(jìn)，另外，最近兩年CLARITY技術(shù)已被成功應(yīng)用于各類(lèi)神經(jīng)疾病的高精度成像研究。
　　本文主要分為兩部分進(jìn)行。第一部分進(jìn)行了CLARITY技術(shù)一系列的摸索及優(yōu)化工作，包括CLARITY技術(shù)必須的電泳裝置的構(gòu)建、電泳條件如溫度、水凝膠溶液配比以及光折射率匹配溶液的優(yōu)化等，并通過(guò)紫外分光光度計(jì)及BCA法分別測(cè)量了不同的條件下所獲得的透明腦的透明度以及蛋白損失率，通過(guò)相關(guān)數(shù)據(jù)分析得到最優(yōu)的CLARITY技術(shù)

3、條件，最后開(kāi)展免疫染色及共聚焦成像研究得到了一些14-3-3zeta蛋白的三維結(jié)構(gòu)信息。
　　接下來(lái)將CLARITY技術(shù)其應(yīng)用于顳葉癲癇的成像研究。通過(guò)構(gòu)建癲癇鼠模型并采用Timm染色法驗(yàn)證成功獲得了顳葉癲癇模型，之后采用CLARITY技術(shù)透明了包含完整海馬約3mm厚的小鼠腦切片并開(kāi)展免疫染色及共聚焦成像，獲取了14-3-3zeta蛋白和S262位點(diǎn)磷酸化Tau蛋白在癲癇小鼠海馬CA1、CA3區(qū)的空間共定位信息，上述這些研究工作為