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文檔簡介
1、白血病,亦稱作“血癌”,是一類由造血干細胞異常引起的血液系統(tǒng)惡性疾病。白血病在我國總發(fā)病率約占5%,其患者數(shù)量在惡性腫瘤中居第8位,在惡性腫瘤引起的死亡率中居第6位,并且呈逐年上升的趨勢。20世紀70年代,哈爾濱醫(yī)科大學附屬醫(yī)院的專家們創(chuàng)造性地將As2O3應用于治療M3型急性早幼粒細胞白血病(APL),之后又發(fā)展到治療維甲酸治療緩解后復發(fā)的M3型患者,完全緩解率達93%以上,已被公認為M3型白血病治療首選藥物。一般認為As2O3治療AP
2、L的主要機制是誘導白血病細胞凋亡,很少考慮其對細胞自噬的影響。本研究從As2O3對L1210細胞增殖、凋亡及自噬的影響,探討其抗白血病的更可能的隱藏機制。
本研究采用MTT法及Brdu-Elisa法測定不同濃度As2O3對L1210細胞增殖的影響,流式細胞術及AO/EB雙染法檢測細胞凋亡,AO染色及MDC染色檢測細胞自噬,免疫印跡法檢測增殖相關蛋白PCNA、凋亡相關蛋白Bax、Bcl-2、自噬相關蛋白LC3B的表達。另用苯誘導
3、的小鼠再生障礙性貧血模型檢測As2O3是否能刺激骨髓細胞的造血功能。
細胞實驗結(jié)果顯示:As2O3對L1210白血病細胞呈劑量、時間依賴性生長抑制作用,24h、48h、72h半數(shù)抑制濃度(IC50)分別為11.61μmol/L±0.05、3.34μmol/L±0.03、0.13μmol/L±0.08。As2O3作用24h,細胞凋亡率隨著 As2O3濃度的升高而升高,5、10、20μmol/L的凋亡率分別為26.52%±0.02
4、、30.99%±0.06、74.48%±0.05。AO/EB雙染法可觀察到細胞形態(tài)發(fā)生明顯變化,如細胞核濃縮、凋亡細胞表面膜出泡、體積變小、細胞破裂并出現(xiàn)凋亡小體等形態(tài)學特征,并呈劑量依賴性。AO染色及MDC染色可觀察到自噬陽性顯色,且藥物濃度越高,陽性率越高。Western-blot結(jié)果顯示:As2O3能上調(diào)自噬相關蛋白LC3B、促凋亡蛋白BAX的表達水平,使細胞增殖相關蛋白PCNA、抑制凋亡蛋白Bcl-2的表達下降,并程劑量依賴性。
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