轉(zhuǎn)錄因子E2-2調(diào)控自噬影響內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖的研究.pdf

1、內(nèi)皮祖細(xì)胞(Endothelial progenitor cells，EPCs)作為內(nèi)皮細(xì)胞(Endothelial cells，ECs)主要來(lái)源，在受損血管內(nèi)皮的修復(fù)中發(fā)揮重要作用。近年有研究表明，轉(zhuǎn)錄因子E2-2可抑制EPCs的增殖。E2-2是一種“螺旋-環(huán)-螺旋”轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，屬于E蛋白家族，在真核細(xì)胞內(nèi)廣泛表達(dá)。但E2-2對(duì)EPCs增殖能力的影響，以及調(diào)控EPCs增殖的內(nèi)在機(jī)制還不十分清楚。自噬作為細(xì)胞的基本生命活動(dòng)，對(duì)維持細(xì)胞

2、生理穩(wěn)定有重要作用。有研究顯示，E2-2能夠通過(guò)Wnt/β-catenin通路抑制腫瘤細(xì)胞自噬，調(diào)控腫瘤細(xì)胞增殖。E2-2能否通過(guò)調(diào)控自噬水平從而實(shí)現(xiàn)對(duì)EPCs增殖的調(diào)控是本研究涉及的切入點(diǎn)。本研究通過(guò)實(shí)驗(yàn)觀察E2-2對(duì)EPCs增殖的影響，以及明確該影響是否通過(guò)調(diào)控自噬水平實(shí)現(xiàn)的，從而為受損血管內(nèi)皮修復(fù)和冠心病治療新策略提供新的理論依據(jù)。
　　目的:
　　明確E2-2通過(guò)調(diào)控自噬影響EPCs增殖，并初步探討其中機(jī)制。

3、　　方法:
　　小鼠脾源性EPCs的分離、培養(yǎng)、鑒定。過(guò)表達(dá)和干擾E2-2后，檢測(cè)EPCs的增殖與自噬水平。自噬抑制劑氯喹(Chloroquine，CQ)不同濃度不同時(shí)間處理EPCs。干擾E2-2后加入CQ與只干擾E2-2不加CQ組對(duì)比EPCs增殖與自噬水平。干擾E2-2后，檢測(cè)EPCs內(nèi)ATG7表達(dá)水平。共同轉(zhuǎn)染干擾E2-2和ATG7后，檢測(cè)自噬標(biāo)志蛋白的變化情況。CCK-8試驗(yàn)用于檢測(cè)EPCs增殖情況，轉(zhuǎn)染Ad-mRFP-GF

4、P-LC3后，共聚焦顯微鏡下觀察EPCs內(nèi)自噬小體和自噬溶酶體。Western blotting實(shí)驗(yàn)檢測(cè)蛋白表達(dá)情況，PCR、Q-PCR檢測(cè)mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.過(guò)表達(dá)E2-2能夠抑制EPCs增殖能力，下調(diào)EPCs自噬水平;
　　2.干擾E2-2能夠增加EPCs增殖能力，上調(diào)自噬水平;
　　3.加入CQ能夠阻斷干擾E2-2引起的EPCs自噬和增殖上調(diào);
　　4.干擾E2-2后，ATG7基因表達(dá)