自噬調控內(nèi)皮祖細胞uPA表達和機制的研究.pdf

1、目的：探討低氧條件下，自噬調控內(nèi)皮祖細胞 uPA表達的影響；探討低氧條件下，自噬內(nèi)皮祖細胞uPA表達的分子機制。
　　方法：1.使用密度梯度離心法提取SD大鼠骨髓中的單個核細胞（BMMNCs），運用差速貼壁法以及EGM-2MV誘導分化培養(yǎng)出EPCs，于體外培養(yǎng)15~30天，定期觀察EPCs的細胞形態(tài)變化，使用乙酰低密度脂蛋白、荊豆凝集素吞噬實驗以及流式細胞法鑒定細胞特征性表型，血管生成實驗檢測EPCs的成血管能力；2.低氧條件下采

2、用慢病毒感染上調和下調自噬關鍵基因ATG-5，熒光顯微鏡觀察感染效率，RT-PCR驗證ATG-5的表達水平，Western-blot檢測EPC中uPA的形成；3.低氧條件下上調和下調自噬關鍵基因ATG-5后，Western-blot檢測mTOR-S6K信號通路磷酸化水平的表達變化。
　　結果：1.提取獲得SD大鼠BMNCs并經(jīng)體EGM-2MV誘導培養(yǎng)后，培養(yǎng)細胞表達相應的內(nèi)皮細胞表面抗原，如CD34、CD133以及VEGFR-2，

3、可以結合UEA-1并吞噬Dil-acLDL，Martrigel成血管實驗顯示其具備成血管能力；2.低氧條件下，上調ATG-5的表達能夠顯著增加uPA的表達（p<0.05），而下調ATG-5表達則能夠降低uPA的表達；3.低氧條件下，上調ATG-5的表達能夠顯著增加m-TOR和S6K的磷酸化（p<0.05），而下調ATG-5的表達能夠降低m-TOR和S6K的磷酸化（p<0.05）。
　　結論：低氧條件下上調和下調自噬關鍵基因ATG-