cRGD修飾的載阿霉素酸敏感膠束的構(gòu)建及抗腫瘤研究.pdf

1、目的：
　　本文旨在構(gòu)建集智能、高效、低毒為一體的cRGD修飾的、生物可降解酸敏感膠束給藥系統(tǒng)，以期實(shí)現(xiàn)阿霉素在腫瘤新生血管和腫瘤細(xì)胞內(nèi)的遞送及藥物的快速釋放。同時(shí)，對(duì)所制備的膠束的體外及體內(nèi)抗腫瘤效果進(jìn)行考察。
　　方法：
　　本文通過(guò)開(kāi)環(huán)聚合反應(yīng)合成生物可降解的兩親性嵌段共聚物PEG-PTMBPEC，通過(guò)酰胺反應(yīng)將cRGD連接到PEG-PTMBPEC末端。采用氫譜（1H NMR）對(duì)合成的聚合物材料進(jìn)行表征。通過(guò)透析

2、法制備了空白膠束和載藥膠束。通過(guò)動(dòng)態(tài)光散射（DLS）、透射電鏡（TEM）及熒光分光光度計(jì)對(duì)膠束的粒徑、電位、PDI、形態(tài)、載藥量及包封率進(jìn)行表征。以αvβ3受體過(guò)度表達(dá)的黑色素瘤細(xì)胞（B16）及人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）為主要的模型細(xì)胞?？瞻啄z束的毒性，cRGD多肽的最佳配體密度及各種處方膠束的IC50值是通過(guò)MTT法測(cè)定的。在細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)部分，通過(guò)激光共聚焦（CLSM）及流式細(xì)胞儀對(duì)膠束的攝取情況進(jìn)行定性及定量的分析。通過(guò)不同的抑

3、制劑對(duì)未經(jīng) cRGD修飾的膠束（NT-micelle）及多肽修飾的膠束（cRGD-micelle）的攝取的抑制情況來(lái)考察膠束的攝取機(jī)制。CLSM進(jìn)一步驗(yàn)證膠束在細(xì)胞內(nèi)的pH敏感性。膠束的體內(nèi)抗腫瘤實(shí)驗(yàn)是在B16荷瘤小鼠的體內(nèi)進(jìn)行的。采用HE染色法考察膠束對(duì)小鼠的心臟毒性。
　　結(jié)果：
　　1H NMR結(jié)果顯示，所合成的PEG-PTMBPEC的純度為80.3％，cRGD的連接效率為82.3%。所制備的膠束粒徑在153-181

4、nm之間，PDI均小于0.3。膠束的載藥量接近10%，包封率近60%。TEM電鏡圖顯示，所制備的膠束形態(tài)圓整且分布均勻，同時(shí)在血清中具有良好的穩(wěn)定性。膠束的體外釋放呈現(xiàn)明顯的pH依賴(lài)性?？瞻啄z束對(duì)正常細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞均無(wú)毒，表明空白載體具有良好的生物相容性。主動(dòng)靶向膠束的IC50值比未經(jīng)修飾的膠束低1.82（B16）及1.78（HUVEC）倍。細(xì)胞對(duì)cRGD-micelle的攝取顯著高于NT-micelle。膠束通過(guò)多種途徑進(jìn)入細(xì)胞，其中

5、以網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞途徑為主。CLSM結(jié)果顯示，細(xì)胞內(nèi)溶酶體的酸性環(huán)境可觸發(fā)膠束的pH敏感性，使藥物在細(xì)胞內(nèi)可快速釋放。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，膠束組的小鼠即使在15 mg/kg的給藥劑量下，仍無(wú)明顯的毒副作用。同時(shí)，cRGD-micelle比NT-micelle表現(xiàn)出更強(qiáng)的抑瘤效果。HE染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，膠束在高劑量的給藥條件下對(duì)心臟無(wú)毒。
　　結(jié)論：
　　本文成功制備了cRGD修飾的酸敏感載阿霉素的膠束。所制備的膠束粒徑均一，