2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:研究在低氧預(yù)處理的不同培養(yǎng)條件及不同處理時間的大鼠骨髓MSCs的Pim-1、Akt以及與之相關(guān)的凋亡蛋白(Bcl-2)、抗凋亡蛋白(Caspase-3、Bax)的表達量,并比較它們之間的變化趨勢。研究低氧預(yù)處理后MSCs的抗凋亡能力、移植后細胞的存活率及對心功能的影響。初步探討經(jīng)低氧預(yù)處理的MSCs抗凋亡的機制。
  方法:將第三代的MSCs置入直徑6cm的培養(yǎng)皿中,實驗共分為六組:正常培養(yǎng)細胞組(對照組);低氧條件下用正常

2、培養(yǎng)液孵育細胞6h(HPC6h);低氧條件下用正常培養(yǎng)液孵育細胞12h(HPC12h+FBS);低氧條件下用不含F(xiàn)BS的培養(yǎng)液孵育細胞12h(HPC12h);低氧條件下用正常培養(yǎng)液孵育細胞24h(HPC24h+FBS);低氧條件下用不含F(xiàn)BS的培養(yǎng)液孵育細胞24h(HPC24h)。低氧預(yù)處理后通過q-PCR法檢測每組Pim-1、Bcl-2、Caspase-3及Bax的表達量;用Western Bolt法檢測低氧預(yù)處理組及Pim-1抑制劑

3、組在不同低氧時間(6h,12h,24h)Pim-1,t-Akt及p-Akt的表達情況;用流式細胞分析法測定低氧預(yù)處理組、Pim-1抑制劑組及對照組的細胞凋亡情況;用Transwell法測定低氧預(yù)處理組、Pim-1抑制劑組及對照組的細胞遷移能力;用JC-1試劑盒檢測低氧預(yù)處理組、Pim-1抑制劑組及對照組的細胞的線粒體膜電位。挑選約300-350g的雌性SD大鼠24只隨機分為三組(對照組、低氧預(yù)處理組及Pim-1抑制劑組)行前降支結(jié)扎術(shù)。

4、術(shù)后一周開胸在結(jié)扎線周邊區(qū)域注射經(jīng)DiI染色后的各組干細胞。細胞移植后一周每組隨機取三只處死,取出心臟行石蠟切片,計數(shù)在心梗區(qū)域存活的干細胞,并比較各組干細胞的存活情況。行心梗模型的SD大鼠,在術(shù)前、術(shù)后三天、細胞移植后一周以及移植后一個月(每組剩余五只)行超聲心動圖檢測,評估大鼠的心功能情況。
  結(jié)果:q-PCR檢測結(jié)果顯示在無血清的培養(yǎng)液條件下低氧預(yù)處理12h,Pim-1蛋白激酶的表達量達到峰值,與其他各組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(

5、P<0.05)??沟蛲鲆蜃覤cl-2的變化與Pim-1的改變同步。凋亡因子Caspase-3及Bax的變化與Pim-1的改變相反(P<0.05)。Western Bolt檢測結(jié)果顯示,t-Akt的濃度和低氧預(yù)處理的時間及培養(yǎng)液條件無關(guān),t-Akt的濃度保持恒定,而p-Akt的濃度隨著低氧預(yù)處理的時間及培養(yǎng)液的條件不同有所變化。Pim-1在低氧預(yù)處理12h時的濃度最高,在相同處理時間下,加入抑制劑組均較無抑制劑組的濃度低。而且p-Akt的

6、表達與Pim-1的表達變化趨勢一致,Pim-1抑制劑亦可以部分抑制p-Akt(P<0.05)。流式細胞分析細胞凋亡情況及Transwell法檢測細胞遷移能力的實驗結(jié)果均顯示低氧預(yù)處理組的抗凋亡能力及遷移能力最強(P<0.05)。JC-1試劑盒檢測結(jié)果顯示低氧預(yù)處理組細胞線粒體膜電位高于對照組及Pim-1抑制劑組。體內(nèi)實驗結(jié)果顯示移植后一周低氧預(yù)處理組的干細胞存活率最高(P<0.05)。心超檢查結(jié)果顯示術(shù)前,術(shù)后三天及細胞移植后一周大鼠心

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