熱休克蛋白70及pim-1基因在白血病骨髓單個(gè)核細(xì)胞的表達(dá)特點(diǎn)及臨床意義研究.pdf

1、研究背景 熱休克蛋白(Heat Shock Protein，HSP)是一類保護(hù)細(xì)胞在熱休克和其它應(yīng)激條件下免受損傷的一種蛋白質(zhì)，具有高度保守性，廣泛存在于從單細(xì)胞生物到哺乳動(dòng)物的整個(gè)生物界。根據(jù)分子量大小，HSP可分為五個(gè)亞家族，其中HSP70是該家系中重要的成員。作為“分子伴娘”，HSP70有助于新合成的蛋白折疊、移位、復(fù)性和降解。近年來在多種腫瘤細(xì)胞均檢測(cè)出上調(diào)的HSP70表達(dá)，提示它可能與腫瘤細(xì)胞的增殖、分化、侵襲、轉(zhuǎn)移及腫瘤免疫

2、密切相關(guān)；一些研究結(jié)果顯示HSP70有調(diào)控細(xì)胞凋亡的作用。新近有研究顯示HSP70在白血病的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮了重要作用。 Pim-1為一原癌基因，所編碼的產(chǎn)物具有絲氨酸／蘇氨酸蛋白激酶活性，在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中高度保守。Pim-1有廣泛的組織表達(dá)，在胸腺、脾、骨髓、胎肝等造血組織以及口腔上皮、前列腺等非造血組織中表達(dá)較高。作為細(xì)胞存活因子，Pim-1可抑制細(xì)胞凋亡，并認(rèn)為與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。有報(bào)道在某些惡性腫瘤中存在Pim-1

3、高表達(dá)。因此認(rèn)為Pim-1在細(xì)胞凋亡、增殖、分化和腫瘤發(fā)生過程中起有重要作用。 目前，有關(guān)HSP70，Pim-1的基因／蛋白表達(dá)相關(guān)研究多以實(shí)體瘤為主，其在血液系統(tǒng)腫瘤，尤其在白血病中的表達(dá)分布或變化的資料甚少。本研究我們以急、慢性白血病為研究對(duì)象，觀察HSP70基因／蛋白，以及Pim-1基因在此類白血病患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞的表達(dá)分布情況，并分析該類基因表達(dá)與白血病分型及預(yù)后的關(guān)系。 本課題研究包括兩部分： 第一部

4、分：白血病患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞HSP70 mRNA和蛋白的表達(dá)特點(diǎn)及臨床意義 第二部分：白血病患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞Pim-1基因表達(dá)特點(diǎn)及臨床意義 第一部分白血病患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞HSP70 mRNA和蛋白的表達(dá)特點(diǎn)及臨床意義 目的觀察HSP70蛋白及基因在白血病患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中的表達(dá)狀態(tài)，確定HSP70表達(dá)狀態(tài)是否與白血病分型、預(yù)后存在規(guī)律性聯(lián)系。 方法 用RT-PCR方法檢測(cè)40例白血病患者和1

5、0例非血液系統(tǒng)腫瘤患者BMMCs HSP70 mRNA的表達(dá)并半定量；用Western印跡技術(shù)檢測(cè)34例白血病患者和10例非血液系統(tǒng)腫瘤患者BMMCs HSP70蛋白表達(dá)，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用成組比較t檢驗(yàn)和方差分析，并結(jié)合白血病類型、腫瘤負(fù)荷程度及對(duì)治療的反應(yīng)進(jìn)行分析。 結(jié)果 (1)白血病組與對(duì)照組BMMCs均存在HSP70 mRNA表達(dá)，其mRNA平均ODR值分別為1.01±0.33和0.40±0.14，兩組差別有顯著性意義(P

6、<0.05)；(2)慢性白血病組HSP70 mRNA表達(dá)的平均ODR值顯著高于急性白血病組(1.31±0.39 vs 0.89±0.26，P<0.05)；CML組，AML組HSP70 mRNA表達(dá)的平均ODR值均顯著高于ALL組(1.02±0.28 vs0.52±0.18，1.25±0.34 vs 0.52±0.18，P<0.05)；(3)腫瘤重度負(fù)荷AL患者組HSP70 mRNA表達(dá)的平均ODR值顯著高于腫瘤輕度負(fù)荷組(1.24±0.

7、30 vs 0.61±0.18，P<0.05)；(4)白血病患者化療后HSP70 mRNA表達(dá)的平均ODR值顯著高于化療前(1.22±0.31 vs 0.91 ±0.23，P<0.05)；(5)白血病組與對(duì)照組BMMCs均存在HSP70蛋白表達(dá)，其蛋白的平均ODR值分別為0.75 ±0.21和0.32±0.12，兩組差別具有顯著性意義(P<0.05)；(6)慢性白血病組HSP70表達(dá)的平均ODR值顯著高于急性白血病組(1.11 ±0.3

8、2 vs 0.68 ±0.16，P<0.05)；CML組、AML組HSP70表達(dá)的平均ODR值均顯著高于ALL組(1.05 ±0.31 vs 0.33 ±0.16，0.81±0.21 vs 0.33±0.16，P<0.05)；(7)腫瘤重度負(fù)荷組白血病患者HSP70表達(dá)的平均ODR值顯著高于腫瘤輕度負(fù)荷組(1.02±0.23 vs 0.39±0.10，P<0.05)；(8)白血病患者化療后HSP70表達(dá)的平均ODR值顯著高于化療前(1.

9、03±0.21 vs 0.72±0.13，P<0.05)。 結(jié)論 白血病患者BMMCs HSP70 mRNA和蛋白表達(dá)顯著高于對(duì)照組。HSP70在慢性白血病、AML、腫瘤負(fù)荷重的患者BMMCs中顯著高表達(dá)，可能與白血病細(xì)胞分化類型和程度有關(guān)，亦提示HSP70可能與促進(jìn)白血病細(xì)胞增殖相關(guān)。白血病患者化療后HSP70表達(dá)增高，其機(jī)制及意義尚需進(jìn)一步研究確定。 第二部分白血病患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞Pim-1基因表達(dá)特點(diǎn)及臨床意

10、義 目的 探討Pim-1 mRNA在白血病患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中的表達(dá)狀況,確定Pim-1 mRNA表達(dá)變化是否與白血病分型、腫瘤負(fù)荷存在規(guī)律性聯(lián)系。 方法 用逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)技術(shù)檢測(cè)40例白血病和10例非血液系統(tǒng)腫瘤患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞Pim-1 mRNA的表達(dá)情況,并結(jié)合白血病類型、白血病腫瘤負(fù)荷程度等進(jìn)行分析。 結(jié)果 (1)白血病組及對(duì)照組BMMCs均表達(dá)Pim-1 mRNA,其平均ODR值分

11、別為1.04±0.19和0.55±0.13,白血病組BMMCs Pim-1 mRNA表達(dá)顯著高于對(duì)照組(P<0.05);(2)ALL組BMMCs Pim-1 mRNA表達(dá)顯著高于AML組和CML組(1.30±0.28 VS 0.92±0.16,1.30±0.28 VS 0.94±0.19,P<0.05);(3)FLT3-ITD突變組BMMCs Pim-1 mRNA表達(dá)的平均ODR值較之非FLT3-ITD突變AL組有顯著增高(1.33±0

12、.23 VS 0.96±0.12,P<0.05):(4)經(jīng)直線相關(guān)分析、直線回歸分析,白血病患者HSP70mRNA表達(dá)平均ODR值與Pim-1mRNA表達(dá)平均ODR值成正相關(guān)(P<0.05),r=0.327。直線回歸方程為Y=0.382+0.619X. 結(jié)論 白血病患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞Pim-1基因的表達(dá)顯著高于非血液系統(tǒng)腫瘤患者;ALL組表達(dá)顯著高于AML組和CML組,且FLT3-ITD突變的AL組顯著高于非FLT3-ITD突變