冷凍保存非血管化異體骨關節(jié)移植免疫學研究.pdf

1、目的：創(chuàng)傷、惡性骨腫瘤切除引起大段骨關節(jié)缺損后的修復一直是困擾骨科界的一大難題。盡管修復該缺損的方式有很多，如關節(jié)融合、人工假體植入、自體骨關節(jié)移植和同種異體骨關節(jié)移植等，但各種方法均有利弊。目前，同種異體骨關節(jié)移植在臨床應用非常廣泛，但免疫性問題使其在臨床上的應用受到很大的限制。本研究試圖從免疫學方面進一步探討經(jīng)冷凍保存的同種異體骨關節(jié)移植后機體的免疫系統(tǒng)反應情況，以期為同種異體骨關節(jié)移植的臨床應用提供理論依據(jù)。
　　方法：實驗

2、在具有不同組織相容性的純系大鼠之間進行異體骨關節(jié)移植，采用Yaremchuk等設計的實驗動物模型。30只Wistar大鼠作為供體，提供60個異體膝關節(jié)，90只SD大鼠作為受體，其中80只作為受體，余下10只作為同系移植供體。80只SD大鼠依次分為A（新鮮同系移植組）、B（新鮮異體移植組）、C（冷凍保存異體移植組）和D（新鮮異體移植術后用環(huán)孢霉素A組）四組，每組20只。所有供體均在膝關節(jié)上、下各1cm處截骨，徹底清除關節(jié)周圍的軟組織，生理

3、鹽水沖洗髓腔，移植時將此膝關節(jié)移植于受體同一部位腹部皮下。其中，移植到C組的異體關節(jié)在移植前需經(jīng)兩部冷凍法處理，D組大鼠于術后持續(xù)應用環(huán)孢霉素A兩周。分別于術前和術后的第1、2、3、4、6、8、10及12周抽取SD大鼠的外周靜脈血借助流式細胞儀檢測移植前后淋巴細胞亞群變化，ELISA法檢測移植前后細胞因子IL-2，IFN-r，IL-4和IL-10變化。
　　結(jié)果：
　　1、四組的CD4+/CD8+和CD25+在最初兩周變化不

4、明顯，隨后B、C兩組從第二周開始逐漸增加，并于第8周達到峰值，D組于第四周開始升高，并于第十周達到最大值，而A組整個測量時間段內(nèi)，無明顯變化。從第3周至12周這段時間段內(nèi)，B組指標明顯高于A組（p<0.01），且高于C、D兩組（p<0.05），CD4+/CD8+和CD25+值變化具有統(tǒng)計學意義；C組指標高于A組（p<0.05），差異具有統(tǒng)計學意義。D組所測指標于第四周之后升高，并高于A組（p<0.05），差異有統(tǒng)計學意義，但與C組比較，

5、差異不具有統(tǒng)計學意義，（p>0.05）。
　　2、細胞因子IL-2、IFN-r、IL-10和IL-4在手術后的前兩周差異不大。隨后B、C兩組細胞因子從第二周開始逐漸增加，并于第8周達到峰值；D組于第四周開始升高，并于第十周達到最大值，而A組整個測量時間段內(nèi)，無明顯變化。從第3周至12周這段時間段內(nèi)，B組中IL-2和IFN-r的測量結(jié)果明顯高于A組（p<0.01），且高于C、D兩組（p<0.05），差異具有統(tǒng)計學意義；C組、D組所測

6、結(jié)果又高于A組（p<0.05），差異具有統(tǒng)計學意義，而C、D兩組之間差異無顯著性（p>0.05)。C組、D組所測IL-10和IL-4明顯高于A、B兩組（p<0.01），差異具有統(tǒng)計學意義；C組與D組相比較，兩組指標差異不大（p>0.05），不具有統(tǒng)計學意義；而B組所測IL-10和IL-4高于A組，差異有統(tǒng)計學意義，（p<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、冷凍保存的異體關節(jié)移植可以誘導機體產(chǎn)生一定程度的免疫排斥反；