免疫抑制劑致慢性移植腎腎病的非免疫學(xué)機(jī)理研究.pdf

1、目的 了解不同免疫抑制劑對于血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)和移植腎組織中TGF-β1和Smads信號傳導(dǎo)系統(tǒng)的影響機(jī)制及其臨床意義。方法(1)大鼠胸主動脈VSMC體外原代培養(yǎng)，以空白處理為對照組，實(shí)驗(yàn)組分別用CsA(3μg/m1)、FK506(1μg/m1)、MMF(0.3μg/m1)和RPM(10μg/m1)給予干預(yù)，分別處理6h和12h后收取標(biāo)本。采用免疫組化和實(shí)時熒光定量PCR檢測各組各時相標(biāo)本中TGF-β1、Smads蛋白和mRNA

2、在VSMC中的定位及表達(dá)。(2)建立SD→Wistar大鼠強(qiáng)化缺血再灌注損傷移植腎加速慢性排斥模型。實(shí)驗(yàn)分為6組：假手術(shù)組、對照組、(CsA6mg/(kg.d))組、FK506(0.15mg/(kg.d))組、MMF(20mg/(kg.d))組、RPM(0.8mg/(kg.d))組，每組每個時間點(diǎn)動物為8只。除假手術(shù)組外的其它各組動物于原位腎移植后當(dāng)天即開始使用CsA10mg/(kg.d)×10d，以避免急性排異反應(yīng)，10d后各實(shí)驗(yàn)組開

3、始應(yīng)用不同免疫抑制劑進(jìn)行干預(yù)處理直至相應(yīng)時間點(diǎn)。分別于術(shù)后4、8及12W時處死實(shí)驗(yàn)動物，采用免疫組化和實(shí)時熒光定量PCR檢測TGF-β1、Smads蛋白和mRNA在腎臟中的定位及表達(dá)。 結(jié)果免疫組化顯示TGF-β1、Smad2和Smad7主要定位于VSMC的細(xì)胞漿和細(xì)胞膜，在細(xì)胞核亦有少許表達(dá)。在移植腎組織中TGF-β1主要定位于腎小球、腎小管和間質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞膜、細(xì)胞漿和細(xì)胞核；Smad7主要定位于腎小管和腎小球細(xì)胞的細(xì)胞漿，間

4、質(zhì)中也有表達(dá)；Smad2主要定位于腎小管細(xì)胞的細(xì)胞漿，腎小球和間質(zhì)也有表達(dá)。與對照組相比各實(shí)驗(yàn)組的TGF-β1和Smad2表達(dá)均增高，而Smad7表達(dá)均降低。在處理后12h的VSMC和和移植后8W、12W的移植腎標(biāo)本中，CsA組、FK506組TGF-β1、Smad2的蛋白和mRNA表達(dá)明顯高于對照組，Smad7的表達(dá)則明顯低于對照組，其差異有顯著性，P＜0.05；RPM組和MMF組TGF-β1、Smad2的表達(dá)低于對照組、CsA組和FK

5、506組，而Smad7的表達(dá)則高于對照組、CsA組和FK506組，差異亦有顯著性，P＜0.05。CsA組與FK506，MMF組與RPM組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論(1)免疫抑制劑可影響VSMC和慢性移植腎腎病組織中TGF-β1信號通路，其主要機(jī)理是通過改變受體激活型Smads和抑制型Smads的表達(dá)和功能狀態(tài)所致；(2)CsA、FK506可導(dǎo)致慢性移植腎腎病，其可能的機(jī)制是上調(diào)Smad2的表達(dá)和下調(diào)Smad7的表達(dá)，引起TGF