CX43基因在肺血減少型先天性心臟病中的表達(dá)及突變研究.pdf

1、目的：通過(guò)研究CX43基因在肺血減少型先天性心臟?。–ongenital Heart Disease，CHD）患者中的表達(dá)變化及突變，初步探討CX43基因在肺血減少型CHD發(fā)病機(jī)制中的作用，進(jìn)一步研究CHD的可能發(fā)病機(jī)制。
　　方法：實(shí)驗(yàn)組：收集蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院與安徽省立兒童醫(yī)院心臟外科2013年4月至2014年10月治療的63例肺血減少型CHD患者術(shù)中切除右室流出道異常肥厚心肌組織，留取大小為5×5×5mm3，年齡在6個(gè)月

2、-14歲，平均年齡為5.09±3.27歲。對(duì)照組：收集蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院與安徽省立兒童醫(yī)院心臟外科2013年5月至2014年10月治療的60例非肺血減少型CHD患者術(shù)中留取右室流出道或右室內(nèi)異常肌束組織，大小為5×5×5mm3，年齡在6個(gè)月-14歲，平均年齡為5.95±2.53歲。應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)CX43蛋白在肺血減少型CHD患者中的表達(dá)水平；提取心肌組織mRNA，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)（Real-time Quan

3、titative Polymerase Chain Reaction，RT-qPCR）檢測(cè)兩組心肌中的CX43基因mRNA表達(dá)變化并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析；采用聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)（Polymerase Chain Reaction，PCR）結(jié)合DNA測(cè)序技術(shù)檢測(cè)CX43基因的外顯子序列并比對(duì)，分析CX43基因突變與肺血減少型先心病的發(fā)生是否有關(guān)。
　　結(jié)果：
　　1.應(yīng)用免疫組織化學(xué)法處理后發(fā)現(xiàn)：實(shí)驗(yàn)組肺血減少型CHD患兒心肌CX43

4、蛋白水平表達(dá)明顯高于對(duì)照組，而且實(shí)驗(yàn)組的CX43蛋白不規(guī)則地紊亂分布于胞漿。
　　2.應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法：設(shè)定內(nèi)參為1，實(shí)驗(yàn)組心肌中CX43基因mRNA表達(dá)的相對(duì)定量為2.616±0.065，表明實(shí)驗(yàn)組心肌中CX43 mRNA表達(dá)水平升高，應(yīng)用SPSS18.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)，結(jié)果顯示兩組之間表達(dá)水平的組間差異（p＜0.05），表明兩組之間表達(dá)水平的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.采用PCR結(jié)合DNA測(cè)序技術(shù)，測(cè)序結(jié)果沒(méi)