用siRNA脂質(zhì)體和Survivin和VEGF雙靶點(diǎn)基因下調(diào)可增強(qiáng)U251細(xì)胞凋亡.pdf

1、目的:探討以survivin和VEGF為雙靶點(diǎn)的siRNA轉(zhuǎn)染對神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞的體外效應(yīng)。
　　方法:分別合成針對survivin和VEGF的siRNA。培養(yǎng)膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞，用脂質(zhì)體包裹survivin-siRNA和/或VEGF-siRNA并轉(zhuǎn)染至U251細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)共分5組:S組:轉(zhuǎn)染survivin-siRNA， V組:轉(zhuǎn)染VEGF-siRNA， SV組轉(zhuǎn)染:survivin-siRNA+VEGF-siRNA，NC組

2、:陰性對照(NC)轉(zhuǎn)染無關(guān)序列-siRNA，BC組:空白對照(BC)轉(zhuǎn)染空白脂質(zhì)體。用熒光實(shí)時(shí)定量PCR和Western Blot分別檢測轉(zhuǎn)染后survivin及VEGF在mRNA及蛋白水平的表達(dá)。用CCK-8及流式細(xì)胞術(shù)分別檢測U251細(xì)胞增殖和凋亡。
　　結(jié)果:
　　1.通過熒光實(shí)時(shí)定量PCR和Western Blot檢測結(jié)果顯示:在轉(zhuǎn)染siRNA48h后，S組和SV組的survivin mRNA和蛋白的表達(dá)均顯著下調(diào)，

3、與NC組、BC組比較有顯著性差異，但兩組之間無明顯差別;S組，V組和SV組的VEGF mRNA和蛋白的表達(dá)均下調(diào)，但V組和SV組與S組相比在mRNA水平上有差異。
　　2.CCK-8檢測:與NC組、BC組相比，S組、V組、 SV組在轉(zhuǎn)染24h、48h、72h后細(xì)胞增殖能力均顯著降低，S組、SV組與V組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，且在轉(zhuǎn)染后72h，雙靶點(diǎn)組（SV組）與單靶點(diǎn)組（S組、V組）相比具有顯著性差異。
　　3.流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)

4、果顯示:與NC組、BC組相比，在轉(zhuǎn)染48h后，S組、V組、SV組細(xì)胞凋亡增加，且SV組與S組、V組相比變化明顯。
　　結(jié)論:
　　1.用脂質(zhì)體包裹的siRNA轉(zhuǎn)染可下調(diào)U251細(xì)胞survivin及VEGFmRNA及其蛋白表達(dá)，使U251細(xì)胞增殖抑制，凋亡增加。
　　2.survivin及VEGF的雙靶點(diǎn)基因下調(diào)可增強(qiáng)其效應(yīng)。
　　3.通過siRNA下調(diào)survivin基因，可下調(diào)VEGFmRNA及蛋白的表達(dá)，反