靶向survivin核酶和siRNA誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡研究.pdf

1、目的：構(gòu)建噬菌體Phi29馬達(dá)RNA與靶向survivin核酶及siRNA的嵌合體，研究其沉默survivin基因的表達(dá)及其誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的效應(yīng)。 方法：構(gòu)建pRNA/Ribozyme（survivin）和pRNA/siRNA（survivin）嵌合體，應(yīng)用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)，將其轉(zhuǎn)染入人腫瘤細(xì)胞株MCF—7和Hela細(xì)胞。采用real—time PCR方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞與對(duì)照細(xì)胞內(nèi)survivin基因mRNA的表達(dá)水平，通過(guò)倒置顯

2、微鏡、倒置熒光顯微鏡以及Annexin—V/PI雙染后流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組腫瘤細(xì)胞凋亡率。 結(jié)果：體外細(xì)胞模型研究結(jié)果表明：①轉(zhuǎn)染pRNA/Ribozyme（survivin）嵌合體的人乳腺癌細(xì)胞株MCF—7與轉(zhuǎn)染突變體pRNA/Ribozyme（mutant）以及未轉(zhuǎn)染對(duì)照組比較，轉(zhuǎn)染pRNA/Ribozyme（survivin）嵌合體的人腫瘤細(xì)胞株survivin mRNA表達(dá)水平顯著降低，轉(zhuǎn)染突變體pRN

3、A/Ribozyme（mutant）與未轉(zhuǎn)染對(duì)照組比較無(wú)顯著差異；②轉(zhuǎn)染pRNA/Ribozyme（survivin）和pRNA/siRNA（survivin）嵌合體后，細(xì)胞凋亡率明顯增高；③通過(guò)共轉(zhuǎn)染GFP表達(dá)質(zhì)粒和pRNA/siRNA（GFP）后，采用倒置熒光顯微鏡和FCM檢測(cè)結(jié)果表明，pRNA/siRNA（GFP）可顯著沉默GFP的表達(dá)，而pRNA/siRNA（survivin）嵌合體對(duì)GFP的表達(dá)無(wú)抑制作用，表明pRNA/siR