2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:
  觀察昆明山海棠配伍益母草(昆母)不同提取物對(duì)人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞(RA-HFLS)增殖的抑制作用,了解其對(duì)RA-HFLS的細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF) mRNA表達(dá)水平的影響,從cyclin D1、bcl-2、bax及caspase-3基因水平探討其作用于細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡的可能機(jī)制。同時(shí)觀察昆母對(duì)絲裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信號(hào)通路蛋白磷酸化的影響,探討其可能的作用機(jī)制。
  

2、方法:
  利用3-5代RA-HFLS為研究對(duì)象,分別給予昆母乙酸乙酯提取物、昆母氯仿提取物、昆母石油醚提取物及昆母正丁醇提取物處理24h、48h及72h,以CCK-8檢測(cè)各提取物對(duì)RA-HFLS的生長(zhǎng)抑制率,流式細(xì)胞儀檢測(cè)24h各組的細(xì)胞周期及凋亡率;昆母乙酸乙酯提取物及氯仿提取物處理24h,利用qPCR檢測(cè)Cyclin D1、VEGF、bcl-2、bax及caspase-3表達(dá)水平,應(yīng)用western bolt檢測(cè)各組ERK、

3、pERK、JNK、pJNK、P38及pP38蛋白水平。
  結(jié)果:
  1.昆母各提取物對(duì)RA-HFLS增殖的抑制作用
  (1)昆母乙酸乙酯提取物:與零加藥組比較,高劑量組能抑制24h的細(xì)胞增殖(P<0.05),而MTX組及所有提取物組均可抑制48h及72h的增殖(均P<0.01)。低劑量組48h的細(xì)胞增殖與MTX組相當(dāng)(P>0.05),而中、高劑量組則比MTX組更強(qiáng)(均P<0.01)。與MTX組比較,低劑量組72h

4、的抑制作用偏弱,而中、高劑量組則更強(qiáng)(均P<0.01)。
  (2)昆母氯仿提取物:與零加藥組比較,24h各組均不能抑制RA-HFLS增殖,而高劑量組抑制率稍高(P>0.05);48h及72h各組均能顯著抑制細(xì)胞增殖(均P<0.01)。與MTX組比較,低劑量組48h的抑制作用相當(dāng)(P>0.05),72h偏弱(P<0.01),而中高劑量組48h及72h的抑制作用則更強(qiáng)(均P<0.01)。
  (3)昆母石油醚提取物:與零加藥組

5、比較,24h各組均不能抑制RA-HFLS增殖,而高劑量組抑制率稍高(P>0.05);48h及72h各組均能顯著抑制細(xì)胞增殖(均P<0.01)。與MTX組比較,低劑量組48h的抑制作用相當(dāng)(P>0.05),72h偏弱(P<0.01),而中高劑量組48h及72h的抑制作用則更強(qiáng)(均P<0.01)。
  (4)昆母正丁醇提取物:與零加藥組比較,24h各組均不能抑制RA-HFLS增殖,而高劑量組抑制率稍高(P>0.05);48h及72h各

6、組均能顯著抑制細(xì)胞增殖(均P<0.01)。與MTX組比較,低劑量組48h的抑制作用相當(dāng)(P>0.05),低劑量組72h的抑制作用偏低(P<0.05),而中高劑量組48h及72h的抑制作用則更強(qiáng)(均P<0.01)。
  (5)相同濃度的昆母各提取物對(duì)RA-HFLS的抑制作用,時(shí)間越長(zhǎng),抑制作用越強(qiáng),抑制率越高;相同作用時(shí)間點(diǎn),藥物濃度越高,對(duì)成纖維樣滑膜細(xì)胞的抑制作用越強(qiáng),抑制率越高。昆母各提取物對(duì)成纖維樣滑膜細(xì)胞增殖的抑制作用,呈

7、時(shí)間和劑量依賴性。
  2.昆母提取物對(duì)RA-HFLS細(xì)胞周期的影響
  干預(yù)24h,每組均與空白組比較G1期及PI。昆母氯仿、乙酸乙酯及石油醚提取物低劑量組G1期及PI均無(wú)變化(均P>0.05)。中高劑量組G1期明顯升高,PI明顯降低(均P<0.01)。昆母正丁醇提取物低、中、高劑量組G1期明顯升高,PI明顯降低(均P<0.01)。
  3.昆母提取物對(duì)RA-HFLS凋亡的影響
  干預(yù)24h后,每組均與空白組

8、比較。MTX組凋亡率明顯升高(P<0.01);氯仿及石油醚提取物低劑量組凋亡率無(wú)變化(均P>0.05);乙酸乙酯及正丁醇提取物低劑量組凋亡率升高(分別P<0.05、P<0.01);各提取物中、高劑量組凋亡率均明顯升高(均P<0.01)。
  每組均與MTX組比較。所有提取物低劑量組凋亡率均偏低(均P<0.01);氯仿、乙酸乙酯及正丁醇提取物中劑量組相當(dāng)(均P>0.05);石油醚提取物中劑量組凋亡率偏低(P<0.01))。昆母各提取

9、物高劑量組凋亡率均偏高(均P<0.01)。
  4.昆母提取物對(duì)RA-HFLS血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、細(xì)胞周期蛋白D1、Bax、bcl-2及caspase-3的影響
  (1)氯仿及乙酸乙酯提取物對(duì)VEGF表達(dá)的影響
  qPCR顯示,與未加TNF-α組比較,TNF-α組VEGF表達(dá)升高(P<0.05)。與TNF-α組比較,MTX組(P<0.05)、乙酸乙酯提取物高劑量組及所有氯仿提取物組(均P<0.01)表達(dá)下

10、降,乙酸乙酯提取物低劑量及中劑量組無(wú)變化(均P>0.05)。與MTX組比較,乙酸乙酯提取物低劑量組VEGF表達(dá)稍高(P<0.05),乙酸乙酯提取物中劑量組及氯仿提取物低劑量組當(dāng)(均P>0.05),乙酸乙酯提取物高劑量組及氯仿提取物中、高劑量組偏高(均P<0.01)。
  (2)氯仿及乙酸乙酯提取物對(duì)cyclin D1表達(dá)的影響
  qPCR顯示,與未加TNF-α組比較,TNF-α組cyclin D1水平明顯升高(P<0.01

11、),與TNF-α組比較,MTX組、乙酸乙酯各組及氯仿中、高劑量組cyclin D1明顯降低(均P<0.01),昆母氯仿低劑量組cyclin D1水平變化不明顯(P>0.05)。與MTX組比較,乙酸乙酯(P<0.05)及氯仿(P<0.01)低劑量組cyclin D1水平偏高,乙酸乙酯中劑量組及氯仿中、高劑量組cyclin D1相當(dāng)(均P>0.05),而乙酸乙酯高劑量組cyclinD1水平則顯著降低(P<0.01)。
  (3)氯仿及

12、乙酸乙酯提取物對(duì)bcl-2表達(dá)的影響
  qPCR顯示,與未加TNF-α組比較,TNF-α組bcl-2水平明顯升高(P<0.01)。與TNF-α組比較,MTX組、乙酸乙酯及氯仿中、高劑量組bcl-2水平明顯降低(P<0.01),昆母氯仿低、中劑量組無(wú)變化(均P>0.05)。與MTX組比較,昆母乙酸乙酯及氯仿低劑量組bcl-2水平偏高(均P<0.01),乙酸乙酯及氯仿中劑量組bcl-2變化不明顯(均P>0.05),乙酸乙酯(P<0.

13、01)及氯仿(P<0.05)高劑量組bcl-2水平則顯著降低。
  (4)氯仿及乙酸乙酯提取物對(duì)bax表達(dá)的影響
  qPCR顯示,與未加TNF-α組比較,TNF-Ⅱ組bax水平降低(P<0.05)。與TNF-α組比較,各組bax表達(dá)水平明顯升高(均P<0.01)。與MTX組比較,乙酸乙酯低劑量組bax表達(dá)相當(dāng)(P>0.05),乙酸乙酯中、高劑量組及氯仿各組均明顯升高(均P<0.01)。
  (5)氯仿及乙酸乙酯提取物

14、對(duì)bcl-2/bax表達(dá)的影響
  與未加TNF-α組比較,TNF-α組bcl-2/bax升高(P<0.05)。與TNF-α組比較,各組bcl-2/bax均明顯降低(均P<0.01)。與MTX組比較,乙酸乙酯低劑量組bcl-2/bax偏高(P<0.05),乙酸乙酯中劑量組及氯仿低中劑量組變化不明顯(均P>0.05),乙酸乙酯及氯仿高劑量組bcl-2/bax水平明顯降低(均P<0.01)。
  (6)氯仿及乙酸乙酯提取物對(duì)ca

15、spase-3表達(dá)的影響
  qPCR顯示,與未加TNF-α組比較,TNF-α組caspase-3水平降低(P<0.05)。與TNF-α組比較,MTX組caspase-3升高(P<0.05)。乙酸乙酯及氯仿低劑量組無(wú)變化(均P>0.05),乙酸乙酯(均P<0.01)及氯仿(P<0.05、P<0.01)中、高劑量組升高。與MTX組比較,乙酸乙酯中、高劑量組及氯仿低、中劑量組無(wú)差異(均P>0.05),乙酸乙酯低劑量組caspase-3

16、偏低(P<0.05)而氯仿高劑量組偏高(P<0.05)。
  5.昆母提取物對(duì)ERK、pERK、JNK、pJNK、P38及p-P38的影響
  昆母乙酸乙酯及氯仿提取物干預(yù)24h。與未加TNF-α組比較,TNF-α組p-ERK與ERK比值稍升高(P>0.05)。與TNF-α組比較,昆母乙酸乙酯低劑量組p-ERK與ERK比值變化不明顯(P>0.05),中、高劑量組p-ERK與ERK比值明顯下降,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.0

17、1);昆母氯仿低、高劑量組p-ERK與ERK比值變化不明顯(均P>0.05),中劑量組p-ERK與ERK比值明顯降低(P<0.01)。
  與未加TNF-α組比較,TNF-α組pJNK與JNK比率升高(P<0.01)。與TNF-α組比較,昆母乙酸乙酯低劑量組及氯仿低、中劑量組比率下降(P<0.05、P<0.01、P<0.05),昆母乙酸乙酯中、高劑量組及昆母氯仿高劑量組均偏高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05、P<0.01、P<0.

18、05)
  與未加TNF-α組比較,TNF-α組p-P38與P38比率升高(P<0.05)。與TNF-α組比較,昆母乙酸乙酯及氯仿提取物各組p-P38與P38比率均明顯降低(均P<0.01)。
  結(jié)論:
  1.昆母氯仿提取物、乙酸乙酯提取物、石油醚提取物及正丁醇提取物均能抑制RA-HFLS增殖,且抑制呈時(shí)間和濃度依賴性,時(shí)間越長(zhǎng),抑制率越高;濃度越大,抑制率越高。同濃度條件下,昆母氯仿、乙酸乙酯與石油醚提取物對(duì)RA

19、-HFLS增殖的抑制作用比昆明正丁醇更強(qiáng)。
  2.昆母氯仿提取物及乙酸乙酯提取物對(duì)RA-HFLS增殖的抑制可能是通過(guò)降低Cyclin D1表達(dá),使細(xì)胞周期G1期及S期發(fā)生阻滯實(shí)現(xiàn)的。
  3.昆母氯仿提取物、乙酸乙酯提取物、石油醚提取物及正丁醇提取物可以呈濃度依賴性地使RA-HFLS發(fā)生凋亡,濃度越高,凋亡率越高。
  4.昆母氯仿提取物及乙酸乙酯提取物促凋亡是由多種因素共同調(diào)節(jié)的,其機(jī)制可能是降低bcl-2表達(dá),升

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