小檗堿對阿霉素所致心肌細胞損傷的保護作用研究.pdf

1、目的：阿霉素(adriamycin)是從松鏈絲菌淺灰色變株中提取的一種蔥環(huán)類抗生素，具有廣譜、高效的抗腫瘤作用，但是其在用藥過程中引起不可逆轉(zhuǎn)的心肌損傷,嚴(yán)重限制了其應(yīng)用范圍。阿霉素引起心肌損傷的具體機制目前尚不明確，氧化應(yīng)激、凋亡、線粒體損傷及細胞內(nèi)鈣超載均有報導(dǎo)，可能是多因素共同作用的結(jié)果。既往研究表明其因素之一是阿霉素可導(dǎo)致細胞內(nèi)ROS生成增加，而ROS可引起心肌細胞內(nèi)DNA氧化損傷，使細胞出現(xiàn)染色體畸變最終導(dǎo)致相應(yīng)細胞凋亡甚至壞

2、死。因此如何提高腫瘤治療效果，擴大阿霉素應(yīng)用范圍，開發(fā)心臟保護劑來抵抗阿霉素引起的心肌損傷是目前亟待解決的問題。
　　小檗堿主要提取于中藥黃連，是一種異喹啉類生物堿，具有清熱、解毒、瀉火、降血糖、降血脂以及調(diào)節(jié)免疫等功效。小檗堿對正常細胞毒性作用不明顯，但可以抑制腫瘤細胞的生長，且可減輕阿霉素引起的心肌損傷，但具體機制尚不清楚。因此本文采用多種檢測技術(shù)進一步觀察小檗堿是否可減輕阿霉素對人源AC16心肌細胞的損傷作用，并在氧化應(yīng)激和

3、DNA水平探討其產(chǎn)生保護作用的可能機制。該研究可為臨床應(yīng)用小檗堿提供基礎(chǔ)研究資料。
　　方法：
　　1通過MTT比色法測定人源AC16心肌細胞存活率，觀察不同濃度阿霉素對心肌細胞的毒性大小，確定阿霉素的適當(dāng)濃度，從而建立其致心肌細胞損傷的模型。
　　2隨機將人源AC16心肌細胞分為六組：空白對照組、阿霉素組、小檗堿組（10μmol/L）、低濃度（1μmol/L）小檗堿+阿霉素組、中濃度（5μmol/L）小檗堿+阿霉素組

4、及高濃度（10μmol/L）小檗堿+阿霉素組。給藥后在37℃、5％CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。小檗堿+阿霉素組均采用給予小檗堿半小時后給予阿霉素。
　　3應(yīng)用流式細胞儀測定細胞中ROS含量、彗星實驗測定細胞DNA的損傷情況以及使用RT-PCR技術(shù)檢測DNA修復(fù)酶X線修復(fù)交叉互補組1（XRCC1）及X線修復(fù)交叉互補組3（XRCC3）的表達情況，觀察對比各組間有無差異。
　　結(jié)果：
　　1通過濃度梯度設(shè)計，依據(jù)心肌細胞存

5、活率篩選阿霉素對心肌細胞作用最佳造模濃度，結(jié)果顯示2μmol/L為合適濃度，心肌細胞存活率明顯下降至約75%。
　　2阿霉素組心肌細胞存活率明顯低于空白對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；小檗堿組與空白對照組比較心肌細胞存活率無明顯差異（P＞0.05）；與阿霉素組比較，低、中濃度小檗堿+阿霉素組細胞存活率升高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），高濃度小檗堿+阿霉素組細胞存活率明顯升高且有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。

6、　　3阿霉素組中ROS含量較空白對照組明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而小檗堿組ROS含量與空白對照組無明顯差異（P＞0.05）；與阿霉素組比較，低、中濃度小檗堿均能降低阿霉素引起的ROS含量升高程度，但不明顯（P＞0.05），高濃度小檗堿+阿霉素組ROS含量明顯降低，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　4阿霉素組與空白對照組比較心肌細胞DNA損傷明顯（P＜0.05），小檗堿組較空白對照組無明顯細胞DNA損傷（P

7、＞0.05）；與阿霉素組相比，低濃度小檗堿可不同程度的改善阿霉素的DNA損傷情況，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），中、高濃度小檗堿可明顯改善阿霉素的DNA損傷，差異顯著（P＜0.05）。
　　5與空白對照組相比較，小檗堿組的DNA修復(fù)酶表達無明顯差異（P＞0.05），而阿霉素組表達明顯減少（P＜0.05）。與阿霉素組相比，低濃度小檗堿組DNA修復(fù)酶表達升高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），中、高濃度小檗堿+阿霉素組DNA修